Chapter20 高效液相色谱法课件.ppt

Chapter20高效液相色谱法反相色谱法中混合溶剂的强度因子：Chapter20高效液相色谱法（三）流动相最优化方法简介：1.根据snyder的溶剂选择性分组，选择具有显著选择性差异的溶剂。2.以其中一种溶剂与底剂组成的二元基础溶剂A系统进行实验，调整溶剂配比，使组分的k在适宜的范围内。例：40%甲醇的水溶液：Chapter20高效液相色谱法3.计算确定具有等洗脱强度的另外两个二元溶剂B和C的组成。如：4.以溶剂a、b、c为溶剂选择三角形上的三个项点A、B、C。在ΔABC各点的洗脱强度均相等。在三角形三条边上的任何一点，都可组成三元混合溶剂流动相。在三角形内任何一点，都可组成四元溶剂流动相。Chapter20高效液相色谱法5.在ΔABC上选择7或10个流动相进行实验，对实验结果进行分析，以色谱优化指标寻找确定最佳流动相。ABC①②③⑤0/0.5/0.5④0.5/0.5/0⑥0.5/0/0.5⑦0.33/0.33/0.33⑨0.16/0.67/0.160.16/0.16/0.67⑩⑧0.67/0.16/0.1640%甲醇溶液37.5%乙腈溶液26.7%四氢呋喃溶液Chapter20高效液相色谱法三、分离条件的选择HPLC中的速率理论1.涡流扩散A=2λdp球形、小粒度、均匀（RSD＜5%）固定相，匀浆高压填充，以降低A。2.纵向扩散B=2γDm可以忽略。因为Dm很小，室温操作，且U大于U最佳，则B项可以忽略。Chapter20高效液相色谱法3.传质阻抗固定相传质阻抗CS可以忽略，因df极小流动相传质阻抗Cm要求：dp小，Dm大Chapter20高效液相色谱法静态流动相传质阻抗：由于部分流动相在固定相微孔内的滞留。Csm∝dp2，Csm∝1/Dm，而Dm∝T/η要求:固定相dp、流动相η都小Chapter20高效液相色谱法 总结： H=A+Cmu+Csmu原因：化学键合相，液体流动相结果：HPLC的实验条件应该是：①小粒度、均匀的球形化学键合相；②低粘度流动相，流速不宜过快；③柱温适当。Chapter20高效液相色谱法第三节高效液相色谱仪组成输液系统进样系统色谱柱系统检测系统数据记录处理系统Chapter20高效液相色谱法一、输液系统（一）、高压输液泵恒流泵：在输送流动相过程中流量恒定。常用柱塞式往复泵恒压泵Chapter20高效液相色谱法Chapter20高效液相色谱法输液泵应具备的性能：流量精度高且稳定流量范围宽能在高压下连续工作液缸容积小密封性能好，耐腐蚀Chapter20高效液相色谱法输液泵操作注意事项：防止固体微粒进入泵体流动相不应含有腐蚀性物质防止溶剂瓶内的流动相被用完不超过规定的最高压力流动相一般应该先脱气Chapter20高效液相色谱法（二）梯度洗脱装置高压梯度洗脱低压梯度洗脱Chapter20高效液相色谱法二、分离和进样系统1.进样器进样阀（六通阀）、自动进样装置2.色谱柱（column）由柱管和固定相组成分析柱、制备柱性能评价H、n、fs、k和α的重复性，或R。Chapter20高效液相色谱法三、检测系统（一）检测器(detector)的主要性能要求：灵敏度（sensitivity）高（检测限低）噪音（noise）低线性范围（linearrange）宽重复性（repeatability）好适用范围广（通用型、专属型）Chapter20高效液相色谱法（二）紫外检测器(ultravioletdetector)1.检测原理：朗伯－比尔(Lambert-Beer)定律，响应信号（吸光度）与浓度成正比A=εCl2.特点：灵敏度较高（10-6—10-9g/ml），噪音低，线性范围宽，稳定性好，适于梯度洗脱，不破坏样品，应用广（分析、制备）。Chapter20高效液相色谱法3.局限：只能检测有紫外吸收的物质，流动相的截止波长应小于检测波长。专属型、浓度型检测器4.分类：固定波长检测器：254nm可变波长检测器：Chapter20高效液相色谱法工作原理：复合光通过流通池，再进入单色器，分光后照射在二极管阵列装置上，同时获得各波长的信号强度，即获得组分的吸收光谱。获得三维光谱－色谱图。用途：吸收光谱用于组分的定性，色谱峰面积用于定量,判断峰纯度。光电二极管阵列检测器(photodiodearray