果胶裂解酶FvePL1和FvePL8在森林草莓中的表达和功能研究.pdf

目录

摘要VI

ABSTRACTIX

缩略词表XII

AbbreviationsXII

第一章文献综述1

1.1森林草莓的概述1

1.2植物细胞壁的组成及在植物生长发育中的作用1

1.3果胶及其代谢过程3

1.4果胶裂解酶(PL)的概念和生物功能4

1.4.1PL家族在植物中的分布4

1.4.2PL对植物生长发育的影响6

1.4.3PL在果实发育中的作用6

1.4.4PL在花粉发育过程中的作用7

1.4.5PL与病原微生物互作的研究8

1.5PL在草莓中的研究进展8

1.6本研究的目的和意义9

第二章组成型表达果胶裂解酶基因FvePL1的功能分析10

2.1材料与方法10

2.1.1实验材料10

2.1.2核酸序列分析10

2.1.3进化树分析11

2.1.4基因时空表达模式11

2.1.5原位杂交11

2.1.6亚细胞定位11

2.1.7植物RNA的提取及cDNA的合成12

2.1.8植物DNA的提取12

2.1.9载体构建13

2.1.10农杆菌转化17

2.1.11农杆菌介导的森林草莓愈伤稳定遗传转化17

2.1.12转基因植株的阳性鉴定19

2.1.13转基因植株的形态学观察20

2.1.14FvePL1转基因植株种子发育情况22

2.1.15转基因植株叶片果胶含量测定22

2.1.16转基因植株的耐旱性23

2.2结果与分析23

2.2.1FvePL1含有果胶裂解酶基因的AmB_all结构域23

2.2.2FvePL1的进化树分析25

2.2.3FvePL1在叶片、花药和果实等多器官中表达26

2.2.4FvePL1定位于细胞壁和细胞质27

2.2.5FvePL1转基因植株的获得29

2.2.6FvePL1转基因植株的阳性鉴定30

2.2.7FvePL1转基因植株形态学及细胞学观察31

2.2.8FvePL1-RNAi植株的叶片果胶含量测定43

2.2.9FvePL1的沉默增强草莓的耐旱性44

2.3讨论45

2.3.1FvePL1通过延迟绒毡层的降解导致花粉败育45

2.3.2FvePL1的沉默增强草莓耐旱性46

第三章花药特异表达果胶裂解酶基因FvePL8的功能分析48

3.1材料与方法48

3.1.1实验材料48

3.1.2核酸序列分析48

3.1.3进化树分析48

3.1.4基因时空表达模式48

3.1.5原位杂交48

3.1.6亚细胞定位48

3.1.7植物RNA的提取及cDNA的合成48

3.1.8植物DNA的提取48

3.1.9载体的构建49

3.1.10农杆菌转化49

3.1.11农杆菌介导的森林草莓稳定遗传转化49

3.1.12转基因植株的阳性鉴定49

3.1.13转基因植株形态学观察50

3.1.14观察种子发育情况50

3.1.15FvePL8的表达调控机制50

3.2结果与分析51

3.2.1FvePL8蛋白含有果胶裂解酶的AmB_all结构域51

3.2.2FvePL8的进化树分析53

3.2.3FveP