植物细胞工程课件第四章细胞规模化培养技术.ppt

ProcesscontrolandmonitoringProcessparameterstobemonitorsSugarconsumptionpHTemperatureFermentationtime(h)AgitationCellDryWeightProductComputersoftwareshavebeendevelopedtomonitorandchangetheprocessonline（二）新型动物细胞培养反应器CellCube细胞方块图4-20CellCube贴壁细胞培养系统图4-21摇袋式细胞培养生物反应器工作示意图摇袋式细胞培养生物反应器(WaveBioreactor)旋转式细胞培养系统(therotarycellculturesyetem，RCCS)(三)反应器培养中的关键问题及解决途径搅拌桨设计加设导流筒减小气泡尺寸供氧方式的改变DCAB4.3细胞规模化培养的主要技术环节种子细胞的繁殖与培养系统的建立细胞规模化培养与调控目的产物的分离与纯化外植体选择种子细胞的繁殖与培养系统的建立高产细胞选择种子细胞选择植物类型：植物细胞的遗传基础是天然产物生产的基本影响因素，不同植物产生的天然产物种类之所以不同，从根本上来说是因为它们具有不同的遗传基础。在确定生产某一种化合物以后，首先必须准确选择那些能够产生目的化合物的植物种类及其品种或单株。组织器官：由于天然产物一般为次生代谢产物，而植物次生代谢产物的积累具有组织器官特异性，因此，在起始细胞培养时应尽量选择自然状态下产生天然产物的器官、组织为外植体。工业用途次生产物植物资源医药可待因（植物碱）Papaversomniferm?薯蓣皂苷配基Dioscoreadeltoidea?奎宁Cinchonaledgeriana?地高辛（异羟基洋地黄毒苷原）Digitalislanata?莨菪胺Daturastrathus?长春花碱Catharanthusroseus农业化学除虫菊酯Chrysanthemumcinerariaefolium食品，饮料ThanmatinThanumatococcusdanielli化妆品茉莉油Jasmimumspp.（引自Ramawat和Merillon，1999）有效成分分析种细胞增殖悬浮细胞系单细胞克隆在大多数情况下，来自起始材料的细胞系通常是一个异质细胞群体，细胞间在次生产物积累能力上有很大差异。为了提高筛选效率，还可根据后续的培养条件适当增加选择压力，也可采用一些突变的方法进行高产突变细胞系筛选。种子细胞的增殖与放大培养，是建立细胞规模化培养体系的中间环节。01目的之一是要获得大量的活跃生长的细胞群体，为细胞大批量生产准备基础材料。02目的之二是为大体积反应器培养提供技术参数。03种子细胞增殖与放大培养成批培养连续培养半连续培养大规模培养体系的建立在一个培养体积中接种细胞和添加培养基后，中途不添加培养基也不更换培养基的方式。其细胞生长动态与实验室摇瓶培养一致，成典型的“S”生长曲线。在一个培养周期中，当细胞生长进入缓慢生长达到静止期时，往往是细胞次生代谢产物积累的时期，此时应尽可能维持细胞活性，延长生产周期，以便获得较高的产物积累。01成批培养（batchculture）02成批培养的优点是培养装置和操作简单，但在培养过程中细胞生长、产物积累、以及培养基的物理状态常常随时间变化而变化，培养检测十分困难。同时，成批培养的周期较短，一个培养周期后细胞和培养液同时取出用于目的产物提取，下一个培养周期必须重新接种种子细胞，因此也增加了培养成本。在培养的过程中，不断向反应器中以一定的流量添加新鲜培养基，同时以相同的流量从系统中取出培养液，从而维持培养系统内在细胞密度、产物浓度以及物理状态上的相对平衡。连续培养（continuousculture）这种培养最大的优点是可以延长细胞培养周期，从而延长目的产物的积累时间，增加目的产物产量。同时，由于系统进入稳定状态后，细胞密度、基质及产物浓度等趋于恒定，因而便于对系统的检测。但连续培养装置相对较复杂，对反应器的设计要求较高。这是一种介于成批培养和连续培养之间的培养方式，其基本方法是在完成上述成批培养的一个周期后，只从反应器中取出大部分细胞悬液，保留小部分细胞悬液作为下一培养周期的种子细胞，然后加入新鲜培养基进行培养。半连续培养（semi-continousculture）12这种培养