转基因技术课件.pptVIP

三、轉基因動物的理論和實踐意義自從轉基因動物技術出現以來，各國政府紛紛投資開展這項工作，現已建立了轉基因小鼠和大鼠，轉基因兔、豬、牛、羊等。這不僅因為轉基因動物具有重要的理論意義，而且還具有實用價值，能夠創造巨大的經濟效益。*TK：胸腺激酶；*superovulate：超數排卵；oviduct：輸卵管；breed：繁殖在轉基因動物制作中，基因轉移是影響外源基因整合效率的十分關鍵的一個步驟，也是技術難度最大的一個步驟，基因轉移需要熟練的操作技術和技巧。*構建酵母人工染色體所需要的元件包括：克隆的端粒（位於染色體末端的特化的DNA序列）、著絲粒（保證每次細胞分裂正確進行）和攜帶DNA複製原點的基因片段（從而使染色體上的DNA可以從正確位點開始合成）。*用於表達的生物反應器包括動物血液、泌尿系統、精囊腺、乳腺等，還包括禽蛋和昆蟲（例如家蠶）個體等。*這些蛋白的價格十分昂貴，以往用基因工程方法進行生產的成本非常高，而且需要複雜的設備；而利用轉基因動物方法生產成本每克不到1美元，不需要複雜的設備，也不會對動物造成傷害。轉基因技術轉基因技術是把已知基因轉移到真核細胞，並整合到基因組中得到穩定表達的技術。是改變物種遺傳性狀的最根本途徑。轉基因技術是1980s初興起的一項生物高技術，1980年，Gordon將克隆的外源基因導入小鼠受精卵的雄原核中，率先獲得了轉基因動物。目前，轉基因技術在動、植物方面都有開展，而且正以強勁的勢頭在發展。通過人工操作的方式，將外源基因整合到動物的基因組內，使該動物能穩定地將此基因遺傳給後代的實驗技術就稱為轉基因動物技術。轉基因動物最早最成功的例子是“超級小鼠”（supermouse）的誕生。1982年底美國四個實驗室報導，將大白鼠生長激素的結構基因GH與金屬硫蛋白基因MT-1的啟動子拼接在一起，組成雜交基因MGH。然後把克隆化MGH基因用顯微注射器注入到小鼠受精卵原核內，將受精卵再移植到假孕母鼠體內發育，結果得到了7只帶有MGH基因的小鼠，其中6只顯著大於同窩小鼠。這些小鼠生長快，74天時的體重即接近同窩正常小鼠的兩倍。有的超級小鼠血清中的生長激素（GH）水準竟達正常小鼠的100—800倍。這一成果的意義在於不僅為遺傳工程和遺傳疾病的研究提供了模型，而且也為加速經濟動物的生長提供了新的技術途徑。一、轉基因動物的製作過程二、轉基因動物的技術方法三、轉基因動物的理論和實踐意義講授提綱轉基因動物技術是一項複雜而且涉及內容廣泛的技術，其製作過程大致如下：1、目的基因的獲得、克隆與重組一、轉基因動物的製作過程2、目的基因的導入3、目的基因整合與表達的檢測利用限制性內切酶獲取目的基因；利用mRNA反轉錄出cDNA；人工體外合成DNA片斷；PCR法擴增特定基因片斷。1、目的基因的獲得、克隆與重組（1）目的基因的獲得：要把基因轉入宿主細胞，首先要把基因克隆化，然後，給目的基因接上適當的啟動子進行重組，以使外源基因有效地整合和表達。目前已經得到了若干真核細胞克隆化基因，如?-珠蛋白基因、TK基因等。（2）目的基因的克隆與重組：即基因轉移，利用顯微操作或其他方法把外源基因注入到動物早期胚胎中，再把胚胎植入到動物子宮內，發育成的個體不僅能表達注入基因決定的性狀，而且能把該基因傳到第二代。2、外源基因的導入轉入的基因一般是隨機整合到宿主動物基因組，但並非所有的外源基因都能整合到動物基因組，而整合的基因也並非都能表達。通過顯微注射將外源基因導入後，大部分基因在細胞經過幾次分裂後就丟失，只有一少部分DNA得以整合。3、外源基因整合與表達的檢測因此，需要對轉基因動物進行嚴格的篩選！目前常用的檢測手段是利用PCR方法結合Southernblot雜交法來檢測外源基因是否整和並表達。只有外源基因整和並表達的動物才是真正的轉基因動物。轉基因小鼠的制做過程圖解在轉基因動物製作中，基因轉移是影響外源基因整合效率的十分關鍵的一個步驟，也是技術難度最大的一個步驟，基因轉移需要熟練的操作技術和技巧。原核顯微注射法逆轉錄病毒感染胚胎法胚胎幹細胞法精子載體法二、轉基因動物的技術方法目前，動物轉基因的方法已發展成許多種，其中主要方法如下：顯微注射法是通過顯微操作儀將外源基因直接注射到受精卵的原核中，該法是產生最早且又最為有效的轉基因方法，目前使用非常廣泛。但原核顯微注射法技術難度比較大，不僅需要昂貴的儀器，而且需要一定的操作技巧。1、原核顯微注射法基因原核注入顯微圖像將外源基因重組到DNA病毒或RNA病毒上，再用重組的DNA病毒或RNA病毒去感染著床前後的胚胎，隨著病毒基因插入到宿主胚胎基因組中，外源基因也自然整合到