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甲基对硫磷免疫亲和电化学检测技术

1范围

本标准规定了甲基对硫磷农药的免疫亲和电化学检测技术的原理、试剂与材料、仪器与设备、试样制备、测定、结果计算与表述、重复性、检测限与特异性。

本标准适用于农产品中甲基对硫磷农药的在线筛查和快速监测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB2763-2019食品安全国家标准食品中农药最大残留限量

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法NY/T789-2004农药残留分析样本的采样方法

3原理

试样中甲基对硫磷农药分子与免疫亲和柱中固定相上抗体发生特异性结合，其他与抗体不发生免疫亲和反应的成分随流动相流出，利用醋酸缓冲液使固定相上抗体变性，将固定相上抗体结合的甲基对硫磷洗脱，进行电化学检测。

4试剂与材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯；实验室用水符合GB/T6682中规定的二级水，标准溶液和流动相用水为一级水。

4.1甲醇：色谱纯

4.2醋酸缓冲液：pH=5.0

5仪器与设备

实验室常规仪器、设备、材料及下列各项。

5.1甲基对硫磷免疫亲和柱，柱容量≥300ng。

5.2普通化学滤纸

5.3容量瓶

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5.4电化学工作站

5.5电化学反应池，其中包括1根玻碳电极、1根Ag/AgCl参比电极和1根铂丝电极。反应池内可包含4mL样品液。

6试样制备

6.1提取

取试样可食部分，切碎后，称取10g±0.1g，加入5mL甲醇-水（80:20）溶液涡旋5min，静置30min。随后将样品溶液在滤纸上进行固液分离。滤液转移至10mL容量瓶并定容至10mL（甲醇-水溶液冲洗滤纸中的样品）。样品滤液由纯水进行5倍稀释，待检测用。

6.2净化

将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃定量管下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃定量管中，将空气压力泵与玻璃定量管连接，调节压力使溶液以不超过2mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，待溶液全部流出后，以10.0mL纯水清洗柱子2次，弃去全部流出液。准确加入2.0mL醋酸缓冲液洗脱，流速不超过1mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，加醋酸缓冲液定容为4.0mL，供电化学检测用。

7测定

7.1检测步骤

在电化学反应池内施加开路电压，维持120s；

在电化学反应池内进行方波扫描，扫描范围（-0.2V，-1.0V），步进电压4mV，振幅25mV，频率25Hz；

在电化学反应池内施加同一开路电压，维持240s；

在电化学反应池内进行方波扫描，扫描范围（-0.6V，0.3V），步进电压4mV，振幅25mV，频率25Hz。

7.2检测条件

上述步骤中的电化学反应池，内含有4mLpH=5.0的醋酸缓冲液；整个电化学检测方法是在室温条件下进行的；甲基对硫磷的定量依据是电化学反应中最后一步方波扫描后氧化峰大小。

8结果计算与表述

试样中甲基对硫磷含量以质量分数X计，单位为微克每千克(μg/kg），按式（1）计算：

（1）

式中：

3

Pi：检测溶液中甲基对硫磷组分的氧化峰高值；

Vi：电化学反应池中检测溶液体积，单位为毫升（mL）；

Ci：甲基对硫磷标准溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；Vs：标准溶液的检测体积（mL）；

Ps：甲基对硫磷标准溶液氧化峰高平均值（系列浓度）；M：试样质量，单位为克（g）。

测定结果用平行测定的算术平均值表示，计算结果表示到小数点后一位。

9重复性

在重复实验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于其算术平均值的15%。

10检测限与特异性

10.1检测限

甲基对硫磷的检测限为0.02mg/kg（GB2763-2019食品安全国家标准食品中农药最大残留限

量）。

10.2特异性

检测方法对杀螟硫磷、甲基毒死蜱、倍硫磷、甲基立枯磷等农药的交叉反应均小于1%。