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ICS71.100.70
X42
团体标准
T/ZHCA###-2021
化妆品舒缓功效评价——斑马鱼幼鱼
中性粒细胞迁移量检测方法
Evaluationofsoothingeffectofcosmetics—detection
methodofneutrophilmigrationinzebrafishlarvae
（征求意见稿）
2021-##-##发布2021-##-##实施
浙江省健康产品化妆品行业协会发布
T/ZHCA###-2021
化妆品舒缓功效评价
斑马鱼幼鱼中性粒细胞迁移量检测方法
1范围
本文件规定了一种用于评价化妆品舒缓功效的检测方法。
本文件适用于化妆品及其原料舒缓功效的检测。
有以下特征的受试物不适用于本文件方法：受试物不能溶解于水或不能制备成能在水中均匀分散的悬浮
液。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡
是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T21808化学品鱼类延长毒性14天试验
3术语及定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
最大耐受浓度maximumtoleratedconcentration；MTC
以3dpf的斑马鱼幼鱼未出现任何死亡（无心跳）和其他毒性效应（心包水肿、躯干弯曲、对机械刺激无反
应、肌肉纹理不清晰等）的浓度。
3.2
daypost-fertilizationdpf
受精后天数；
是指斑马鱼受精卵受精后的天数。
4方法原理
SLSSLS
十二烷基磺酸钠（）是人体皮肤刺激物模型斑贴试验常见的阳性对照物，刺激后能诱发表皮
炎症细胞浸润，可导致水肿、红斑、瘙痒、疼痛等症状。对皮肤的刺激表型主要表现为皮肤炎症，炎症早
期主要表现为毛细血管扩张、通透性亢进和水肿。刺激物进入斑马鱼体内，诱导炎症反应，中性粒细胞发
生免疫应答，向皮肤表皮迁移并聚集。
利用转基因中性粒细胞绿色荧光品系斑马鱼（MPX）处理前后皮肤中性粒细胞数量变化来检测样品
是否具有舒缓功效。
5材料和试剂
除非另有说明，所用试剂均为分析纯。水为新制蒸馏水或去离子水，pH为6.5~8.5，电导率≤10μS/cm。
T/ZHCA###-2021
5.1斑马鱼幼鱼，使用转基因中性粒细胞绿色荧光品系斑马鱼的幼鱼。
5.2甲基纤维素（Methylcellulose，CAS号：9004-67-5）。
5.33%甲基纤维素：称取3.0g甲基纤维素，缓慢加入到97.0g沸水中，边加边搅拌，待甲基纤维素
完全溶解后，停止加热，继续搅拌冷却至室温，用铝箔纸密封烧杯口，放在4℃冰箱保存。
5.4标准稀释水，按附录A中描述的方法配制。
5.5造模剂：60μg/mL十二烷基磺酸钠（Sodiumlaurylsulfonate，CAS号：2386-53-0）。
5.6阳性对照样品：0.0625%甘草酸二钾（Dipotassiumglycyrrhizinate，CAS号：68797-35-3）。
5.7助溶剂：甲醇（Methylalcohol，CAS号,67-56-1，分析纯试剂）。
6仪器和设备
6.1生化培养箱：带有温控和进风装置，温度控制范围5℃~50℃，精度±0.1℃。
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