无菌保证基本原理与实际应.ppt

半对数座标tlgN102030123芽孢的耐热参数：D值-*-指一定温度下将微生物杀灭90％或下降一个对数单位所需要的时间。lgNt1234t1t2DD=t2-t1单位：分钟灭菌温度对D值的影响灭菌温度低时，达到同一灭菌效果的时间就长115℃121℃125℃lgNt△lgN=1D125D121D115F0值：达到同一灭菌效果的概念

F0值即标准灭菌时间指产品在灭菌过程中获得的与标准参照条件（121℃）相同灭菌效果的曝热时间lgNtLgNoLgNt121℃117℃△LgNFot1t2不同灭菌温度下的灭菌率-*-灭菌温度℃灭菌率L1000.0081050.0251120.1261150.2511160.3161180.5011200.7941211.0001221.251231.59灭菌率：为达到与某一温度下灭菌1分钟相同的灭菌效果，在121℃下灭菌所需要的灭菌时100℃灭菌时1分钟，相当于121℃灭菌0.008分钟，即Fo值为0.008分钟105℃灭菌40分钟时，Fo约为1分钟，能使D值为1分钟的芽孢数量下降1个对数单位lgN2345-2-3-41-5-6-101234576891012分11-lgSAL＝F0/D–lgN0

SAL:无菌保证水平N0:灭菌前微生物污染量无菌保证水平与F0、D值及带菌量的关系-*-灭菌过程的Fo示意-*-1“每批产品中，污染品概率不得超过一百万分之一”，无菌的这一量化标准应当可以用试验来证明的。用无菌检查法显然是不可能的。2然而，每瓶产品微生物存活的概率却可计算的。3这就需要测试产品灭菌前微生物污染数、D值，使用对数规则，并用生物指示剂试验来证实。4量化指标+计算+试验，使无菌标准成为工业界可执行的标准无菌保证水平举例-*-假定灭菌开始时产品中的污染微生物总数（N0）为100cfu/瓶，污染微生物的耐热参数（D）为1分钟，要达到药典规定的SAL的标准，灭菌F0值应达到多少？相当于121℃和115℃下灭菌多少分钟？01答：F0=（-lgSAL＋lgN0）×D=（6+lg100）×1=8分钟，需在121℃下灭菌8分钟。02换算成115℃下的灭菌时间是：F0/L115=8/0.25=32分钟。03无菌保证水平举例二-*-某复方氨基酸注射液采用110℃，30分钟的灭菌程序，起始污染微生物仍为100cfu/瓶，D值为0.5分钟，请计算无菌保证值和残存微生物污染的概率。01答：-lgSAL=F0/D-lgN0=L110×t/D-lg100=0.08×30/0.5-2=2.802残存微生物的概率SAL为10-2.8＝0.0015803通过无菌检查的概率为(1-0.00158)20=0.96904第二部分实际应用灭菌工艺的选择－欧盟灭菌工艺决策树能否121℃，15分钟湿热灭菌121℃，15分钟湿热灭菌是否能否采用F0≥8的湿热灭菌，以达到SAL≤10-6采用F0≥8的湿热灭菌，以达到SAL≤10-6是否能否对药液除菌过滤药液除菌过滤及无菌灌封无菌原料，无菌配制无菌灌封是否灭菌工艺与灭菌前微生物控制的关系-*-灭菌工艺灭菌前微生物风险与控制要求类别过度杀灭F0≥12低，不必每批监控污染菌最终灭菌工艺，无菌保证值≥6残存概率F0≥8高，应每批监控污染菌，尽量加入除菌过滤器，应有原料微生物标准F08很高，必须采用除菌过滤，每批监控过滤前污染菌，监控每批灌装区的环境非最终灭菌工艺（无菌生产工艺）无菌保证值≥3产品灭菌完全的必要措施-*-从公式-lgSAL＝F0/D–lgN0看灭菌完全的必要措施足够高的F0值受控的产品灭菌前污染菌状况需氧菌总计数（微生物污染水平）污染菌耐热性产品灭菌完全的必要措施-2-*-通常采用的中间控制手段：对每批的灌封开始和结束阶段，分别对灌装好的半成品取样检测。样品须作需氧菌总计数将检品液置于100℃下加热15分钟左右，检查是否有耐热芽孢存活须对微生物学检测结果进行趋势分析。产品灭菌完全的必要措施-3-*-FDA要求－“对于在灭菌前产品污染菌检测中所发现的耐热孢子，必须与验证灭菌工艺所用生物指示剂的耐热性进行对比”具体要求：产品灭菌完全的必要措施-4-*-1如经热处理后检出的微生物是芽孢类微生物。需将其培养并收集芽孢，测定其的耐热性，