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规模化猪场非洲猪瘟环境样品监测技术规范

一、监测目的与原则

(1)监测目的：规模化猪场非洲猪瘟环境样品监测旨在及时发现和预防非洲猪瘟的传播，保障我国生猪产业的健康发展。非洲猪瘟作为一种高度传染性疾病，对养猪业造成严重威胁。通过环境样品监测，可以准确评估猪场内非洲猪瘟病毒的污染程度，为制定防控策略提供科学依据。根据我国农业农村部数据，2018年8月至2020年12月，全国共发生非洲猪瘟疫情超过2000起，造成生猪死亡超过1000万头，经济损失巨大。因此，加强环境样品监测，对于有效控制非洲猪瘟疫情具有重要意义。

(2)原则：监测工作应遵循科学性、规范性、时效性和全面性的原则。科学性要求监测方法、技术和指标符合国家标准和行业标准，确保监测结果的准确性和可靠性。规范性要求监测流程、操作和记录应符合相关规定，确保监测过程的规范性和一致性。时效性要求监测工作应迅速、高效，确保及时发现疫情并采取相应措施。全面性要求监测范围应覆盖猪场内所有可能存在病毒的环境样品，包括猪舍、粪便、饲料、水源等，确保监测结果的全面性。

(3)监测内容：环境样品监测主要包括猪舍内部环境、猪舍外部环境、饲料和水源等。猪舍内部环境监测包括空气、地面、墙壁、设备等；猪舍外部环境监测包括猪舍周边的土壤、植被、水源等；饲料和水源监测包括饲料原料、饲料加工场所、水源等。监测指标主要包括非洲猪瘟病毒核酸、病毒抗原和病毒抗体等。例如，某规模化猪场在2019年开展了环境样品监测，共采集猪舍内部环境样品100份，猪舍外部环境样品50份，饲料样品30份，水源样品20份。通过检测，发现猪舍内部环境样品中病毒核酸阳性率高达10%，猪舍外部环境样品中病毒核酸阳性率为5%，饲料样品中病毒核酸阳性率为8%，水源样品中病毒核酸阳性率为3%。这些数据为该猪场及时采取防控措施提供了重要依据。

二、监测范围与对象

(1)监测范围：规模化猪场非洲猪瘟环境样品监测范围包括猪场内所有可能存在病毒的环境样品，如猪舍、粪便、饲料、水源等。具体包括猪舍内部环境，如空气、地面、墙壁、设备等；猪舍外部环境，如猪舍周边的土壤、植被、水源等；饲料和水源监测，包括饲料原料、饲料加工场所、水源等。此外，监测范围还涵盖猪场周边环境，如周边农田、养殖场、屠宰场等，以及可能接触猪场动物的野生动物栖息地。

(2)监测对象：监测对象主要包括猪场内所有与生猪直接接触或间接接触的物品和环境。具体包括生猪、猪舍、饲养人员、运输工具、饲料、水源等。生猪作为非洲猪瘟的主要宿主，其健康状况直接关系到疫情的传播和防控。猪舍作为生猪生活的主要场所，其环境样品的监测对于评估病毒污染程度至关重要。饲养人员、运输工具等也可能携带病毒，因此也应纳入监测范围。

(3)监测频次：监测频次应根据猪场规模、疫情风险等级、季节变化等因素综合考虑。一般而言，规模化猪场应每月至少开展一次环境样品监测。在疫情发生期间，监测频次应增加至每周一次。对于高风险区域或猪场，监测频次可适当提高。此外，在猪场发生疑似或确诊病例时，应立即开展全面的环境样品监测，以迅速查明疫情来源和传播途径。

三、监测方法与程序

(1)监测方法：规模化猪场非洲猪瘟环境样品监测采用PCR（聚合酶链反应）技术进行病毒核酸检测，这是目前最常用的检测方法，具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。具体操作步骤如下：

首先，对采集到的环境样品进行预处理，包括样品的采集、保存、运输和预处理等。采集样品时，应使用无菌操作技术，确保样品的无污染。样品采集后，需立即放入专用采样箱，并按照规定温度保存和运输，以防止病毒降解。

预处理过程中，需对样品进行破碎、匀浆、过滤等处理，以提取病毒核酸。提取过程中，应使用专业的核酸提取试剂盒，严格按照操作说明书进行，确保提取效率。

接下来，进行PCR扩增。首先设计针对非洲猪瘟病毒特异基因的引物，然后进行PCR反应。PCR反应体系包括模板DNA、引物、dNTPs（脱氧核糖核苷酸）、Taq聚合酶等。反应条件根据不同试剂盒的要求进行调整。

最后，进行PCR产物检测。通常采用琼脂糖凝胶电泳进行，观察特异性条带。若出现特异性条带，则表明样品中存在非洲猪瘟病毒核酸。

(2)监测程序：监测程序分为样品采集、样品处理、PCR扩增、产物检测和结果分析等五个步骤。

样品采集：根据监测范围和对象，选择合适的采样点。在猪舍内部环境，可选择猪舍地面、墙壁、设备表面等部位；在猪舍外部环境，可选择猪舍周边土壤、植被、水源等；在饲料和水源监测，可选择饲料原料、饲料加工场所、水源等。采样时，需按照无菌操作技术，确保样品的完整性。

样品处理：将采集到的样品进行预处理，包括样品的破碎、匀浆、过滤等，提取病毒核酸。

PCR扩增：使用PCR技术对提取的核酸进行扩增，得到PCR产物。

产物检测：采用琼脂糖