糖和苷类化合物 (2).ppt

难点：某些多糖因含有酸、碱性基团，易于蛋白质相互作用，虽不是糖蛋白，也较难去除对碱稳定的糖蛋白。在硼氢化钾存在下，用稀碱温和处理，可以把这种结合蛋白分开。第55页，共101页，星期日，2025年，2月5日2三氟三氯乙烷法1分三氟三氯乙烷加入到1份多糖溶液中搅拌10分钟，离心得水层，水层相用上述溶液再处理2次即得到无蛋白质的多糖。优点：此法效率较高。缺点：但因溶液沸点低易挥发，不宜大量应用。条件：搅拌时应在低温条件下进行。第56页，共101页，星期日，2025年，2月5日3三氯醋酸法在多糖水液中滴加3%三氯醋酸，直至溶液不再继续浑浊为止，5-10度放置过夜，离心除去胶状沉淀即得无蛋白质的多糖溶液。缺点：此法较为剧烈，往往会引起某些多糖的降解。第57页，共101页，星期日，2025年，2月5日上述三种方法均不适合于糖肽，因糖肽也会像蛋白质那样沉淀。除去蛋白质后，透析。乙醇等沉淀，得到基本没有蛋白质与小分子杂质的多糖混合物。第58页，共101页，星期日，2025年，2月5日第六节糖和苷类的检识

原理：利用糖的还原性和糖的脱水反应所产生的颜色变化、生成沉淀等现象来进行理化检识。方法：试管反应薄层色谱纸色谱等第59页，共101页，星期日，2025年，2月5日一试管反应（一）Molish反应—判断样品中是否含有游离或结合糖方法：样液中加5%α-奈酚乙醇液1～3滴，摇匀后沿试管壁缓缓加入浓硫酸，若在两液面间有紫色环产生，说明样品组成中含有糖或苷类。缺点：不能判定是否含糖还是苷类第60页，共101页，星期日，2025年，2月5日弥补方法：（1）将样品的醇提取液进行菲林反应，如产生砖红色氧化亚铜沉淀，说明有游离糖；反应液除去沉淀，再将除去了游离糖的滤液进行molish反应，如呈阳性反应，说明存在苷类。（2）水提取液往往含有大量的单糖、低聚糖、多糖等，难以直接检识苷类，可用正丁醇萃取，正丁醇萃取液蒸去溶剂后进行molish反应，如呈阳性则表明含有苷类。第61页，共101页，星期日，2025年，2月5日（二）菲林反应和多伦反应反应阳性说明存在还原糖，而非还原糖和苷类则呈阴性反应。将反应液滤液酸水解后再进行上述反应，阳性说明存在多糖或苷类。（三）水解反应苷类水解后产生糖和苷类，苷元一般具亲脂性，水溶性差，易再水解液中析出沉淀，如样品酸水解后放冷的反应液中出现沉淀，说明可能存在苷类。低聚糖、多糖酸水解后产生单糖是水溶性的而不会有沉淀出现。还可将苷元以氯仿提取，利用苷元的性质进行检识。第62页，共101页，星期日，2025年，2月5日二、色谱检识

常用吸附剂：硅胶、反相硅胶、也可用纤维素进行薄层色谱（一）薄层色谱展开剂：正丁醇-乙酸-水（4：5：1，上层）氯仿-甲醇-水（6：35：10，下层）乙酸乙酯-正丁醇-水（4：5：1，上层）极性小苷类：氯仿-甲醇、丙酮-甲醇反相硅胶：氯仿-甲醇、氯仿-甲醇-水、甲醇-水（二）纸色谱展开剂：水饱和的有机溶剂正丁醇-乙酸-水（4：5：1，上层）正丁醇-乙酸-水（4：2：1，上层）水饱和苯酚第63页，共101页，星期日，2025年，2月5日显色剂

原理：利用糖的还原性或由于形成糖醛后引起的呈色反应。作用：可以决定糖的斑点的位置可区分其类型常用的显色剂有苯胺-邻苯二甲酸试剂、三苯四氮试剂（TTC试剂）、间苯二酚-盐酸试剂、双甲酮-磷酸试剂等。这些显色剂对不同的糖显不同的颜色。有些显色剂中有硫酸，只能用于TLC。例如茴香醛-硫酸试剂、间苯二酚-硫酸试剂、α-奈酚-硫酸试剂、酚-硫酸试剂等。喷后一般要在100℃加热数分钟至斑点显现。以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶薄层，在使用含硫酸的显色剂时应注意加热的温度与时间。第一章糖和苷类化合物第64页，共101页，星期日，2025年，2月5日第七节苷类的结构研究

一、物理常数的测定包括熔点、沸点、比旋度、折光率和比重等，固体纯物质的熔点，其熔距应在0.5-1.0℃的范围内。液体物质可测定其沸点。液体纯物质应有很恒定的折光率及比重。比旋度也是物质的一种物理常数。

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