第十四章 免疫学检测技术课件.ppt

第十四章免疫学检测技术光照发光（photoluminescence）是指发光剂（荧光素）经短波长的入射光照射后，电子吸收能量跃迁到激发态，在其回复至基态时，发射出较长波长的可见光（荧光）。生物发光（bioluminescence）是指发生在生物体内的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧光素，在荧光素酶的催化下，利用ATP能，生成激发态氧化型荧光素，它在回复基态时多余的能量以光子的形式释放出来。第十四章免疫学检测技术化学发光（chemiluminescence）是指伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。某些物质(发光剂)在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能，使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发射光子的形式释放出能量，这一现象称为化学发光。化学发光第十四章免疫学检测技术一些化学反应能释放足够的能量把参加反应的物质激发到能发射光的电子激发态，若被激发的是一个反应产物分子，则这种反应过程叫直接化学发光。反应过程可简单地描述如下：A十BC*C*C＋h·γ其中γ为光子，C*表示C处于单线激发态。第十四章免疫学检测技术发光免疫分析技术（Luminescentimmunoassay，LIA）

1.原理：（1）LIA：在氧化还原反应中电子被激发，可释放光子，使发光剂鲁米诺（氨基苯二酰肼类）发光。用发光剂标记抗原或抗体（2）发光酶免疫测定（LEIA）：用能催化发光反应的酶（如葡萄糖氧化酶）标记抗原或抗体，酶可使发光剂发光。该法经酶促放大，更灵敏.根据发光的强弱对抗原或抗体定量.2.优点：无放射性，故现正逐步取代RIA第十四章免疫学检测技术用吖啶酯直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物，这时只需加入氧化剂（H2O2）和NaOH使成碱性环境，吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解、发光。由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的光子能，这部分光的积分与待测抗原的量成正比，可从标准曲线上计算出待测抗原的含量。直接化学发光免疫分析第十四章免疫学检测技术发光YYY磁微粒被测抗原+抗体+带丫啶酯标记物抗体YYYYYYYYYYY冲洗后---夹心法（1）加入H2O2（pH10）（2）加入碱（pH10）直接化学发光的机理第十四章免疫学检测技术磁微粒模式图YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY特点已结合的抗原和抗体与未结合部分的易分离磁微粒技术第十四章免疫学检测技术第三节免疫酶技术在食品检测中的应用ELISA基本原理在测定时，把受检酶标抗体或抗原和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。第十四章免疫学检测技术第三节免疫酶技术在食品检测中的应用ELISA基本原理碱性磷酸酶或过氧化物酶第十四章免疫学检测技术第三节免疫酶技术在食品检测中的应用酶联免疫吸附剂测定enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA二、ELISA的种类P320直接法测定抗原间接法测定抗体双抗体夹心法测定抗原双抗原夹心法测定抗原竞争法测定抗原第十四章免疫学检测技术第三节免疫酶技术在食品检测中的应用第十四章免疫学检测技术第三节免疫酶技术在食品检测中的应用二、ELISA的种类双抗原夹心法测定抗原第十四章免疫学检测技术第三节免疫酶技术在食品检测中的应用二、ELISA的种类双抗体夹心法测定抗原第十四章免疫学检测技术第十四章免疫学检测技术第十四章免疫学检测技术ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条