魏培海仪器分析高效液相色法.ppt

三、色谱柱组成：包括柱管和固定相两部分。柱管材料通常采用优质不锈钢，柱长一般为5~40cm，内径为1~6mm。第31页，共79页，星期日，2025年，2月5日色谱柱的两端有烧结不锈钢或多孔聚四氟乙烯过滤片，以防止柱内的填料流出。填充好固定相后的柱子有方向性，在使用时，应使流动相的方向与柱子管外箭头标的方向一致。第32页，共79页，星期日，2025年，2月5日四、检测器检测器类型最高灵敏度（g/mL）温度影响流速影响用于梯度洗脱紫外光度(UV)选择性5?10-10低无可以示差折光(RI)通用性5?10-7有无不可荧光(FD)选择性10-12~10-9低无可以红外吸收(IR)选择性~10-7低无可以极谱选择性10-10~10-9有有困难电导选择性10-9有有不可质谱通用性~10-8无无可以第33页，共79页，星期日，2025年，2月5日1．紫外检测器应用最广：适于约有70％的样品。灵敏度高：线性范围大：死体积小：（1mm×10mm，8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感。分类：固定波长型、可调波长型和二极管阵列检测器。特点：第34页，共79页，星期日，2025年，2月5日固定波长：254nm或280nm固定波长紫外检测器第35页，共79页，星期日，2025年，2月5日可调波长紫外检测器第36页，共79页，星期日，2025年，2月5日第37页，共79页，星期日，2025年，2月5日二极管阵列检测器第38页，共79页，星期日，2025年，2月5日第39页，共79页，星期日，2025年，2月5日第40页，共79页，星期日，2025年，2月5日2．荧光检测器工作原理：利用某些试样具有荧光特性进行检测。特点：高灵敏度、高选择性；对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；第41页，共79页，星期日，2025年，2月5日第42页，共79页，星期日，2025年，2月5日3．示差折光检测器工作原理：折光指数与组成有关，连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比；特点：通用型检测器；灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱。分类：偏转式、反射式和干涉型三种。第43页，共79页，星期日，2025年，2月5日偏转式：它是基于折射率随介质中的成分变化而变化，如入射角不变，则光束的偏转角是流动相(介质)中成分变化的函数。因此，测量折射角偏转值的大小，便可得到试样的浓度。第44页，共79页，星期日，2025年，2月5日第45页，共79页，星期日，2025年，2月5日第二节液相色谱中的固定相和流动相一、液相色谱固定相二、液相色谱流动相第46页，共79页，星期日，2025年，2月5日一、液相色谱固定相1．按固相材料的刚性程度分类刚性固体硅胶：用于液固色谱的固定相，液相色谱的担体，化学键合固定相基质材料。硬质凝胶聚苯乙烯与二乙烯基苯交联而成的多孔颗粒：只应用在离子交换色谱和凝胶色谱中。第47页，共79页，星期日，2025年，2月5日2．按固相填料的疏松程度分类薄壳型微珠载体（表面多孔型）构成：30～40μm的玻璃微球，表面附着一层厚度为1～2μm的多孔硅胶、多孔氧化铝或分子筛等，形成壳形结构。特点：①多孔层厚度小、孔浅、柱效高；②分配过程在载体表面进行，出峰快；③颗粒大，装柱容易，适于常规分析。第48页，共79页，星期日，2025年，2月5日全多孔型载体构成：硅胶、氟化铝或硅藻土的微粒凝聚而成多孔球体。特点：颗粒较细，整个微粒全部是多孔性物质，表面积大，负荷量大。适合于复杂混合物分离和痕量分析。第49页，共79页，星期日，2025年，2月5日第50页，共79页，星期日，2025年，2月5日3．化学健合固定相通过化学键的方式把有机分子结合到载体表面，形成一种新型固定相。它可以避免因机械涂布固定液，导致在色谱分离中使固定液流失的缺陷。第51页，共79页，星期日，2025年，2月5日化学键合相的载体主要是硅胶（表面有硅醇基）：第52页，共79页，星期日，2025年，2月5日第53页，共79页，星期日，2025年，2月5日第54页，共79页，星期日，2025年，2月5日时间，min固定相：C1固定相：C8固定相：C18硅胶-烷基键合相中烷基链长对