色谱毛细管电泳法.ppt

*例1兔血浆中氟比洛芬的测定电泳条件：75?m?100cm毛细管柱分离电压30kV,温度30C°虹吸进样30sUV检测波长254nm分离缓冲液为20mmol/L硼砂含25mmol/LSDS,pH9.02讨论:硼砂缓冲液中加入SDS可包裹血浆中蛋白质，减少蛋白质对分离测定的干扰和对柱的污染空白血浆血样内标第31页，共62页，星期日，2025年，2月5日*例2高效毛细管电泳法测定注射用水溶性维生素的含量采用胶束电动毛细管色谱法，分离分析注射用水溶性维生素制剂中VB1、VB12、VB6、VC、烟酰氨、叶酸、D-生物素、核黄素磷酸钠、泛酸钠9种成分电泳条件：未涂层熔融石英毛细管(67cm×50??m，有效长度55cm)运行缓冲液为50mmol/LSDS-50mmol/L的硼酸钠（pH8.33）检测波长214nm压力进样（6.89KPa×10s）运行电压15.0kV；毛细管柱温25℃第32页，共62页，星期日，2025年，2月5日*分析前毛细管处理每天分析之前，分别依次用1mol/L氢氧化钠溶液、高纯水、运行缓冲液冲洗5,10,10min每次分析之间分别用0.1mol/L氢氧化钠溶液、高纯水、运行缓冲液冲洗毛细管3,5,5min第33页，共62页，星期日，2025年，2月5日*测定方法取约1.5g的内容物，精密称定，置于10ml量瓶中，用水冲洗瓶内壁，洗液与样品合并，加水溶解并稀释至刻度，混匀。用0.22?m微孔滤膜过滤后，在上述电泳条件下进样，记录维生素B12和D-生物素的峰面积另精密量取上述样品溶液1.0ml,置于100ml量瓶中，加水稀释至刻度、摇匀，同法测定，记录VB1,VB6,VC、烟酰氨、叶酸、核黄素磷酸钠、泛酸钠的峰面积，按外标法计算样品含量第34页，共62页，星期日，2025年，2月5日*测定结果测得各种成分按标示量计算的百分含量（%）在97.5±0.9到103.8±0.7之间（n=3）制剂中9种成分的毛细管电泳图如下：1-烟酰氨；2-VB6；3-D-生物素；4-核黄素磷酸钠；5-VB12；6-VC；7-泛酸钠；8-叶酸；9-VB1混合对照液制剂第35页，共62页，星期日，2025年，2月5日*毛细管电色谱（CEC）将HPLC中的固定相填充到毛细管中作为固定相，以电渗流为流动相的驱动力，利用样品与固定相的相互作用的差异而达到分离HV分离柱检测器分流控制阀反压阀高压电源电极第36页，共62页，星期日，2025年，2月5日*例氟西汀和西替利嗪对映体的双动态吸附毛细管电色谱手性分离以SO3-?-CD为手性选择剂，海美溴铵(HDB)为阳离子表面活性剂，在Tris-H3PO4(pH3.0)的体系中分离了氟西汀和西替利嗪对映体色谱条件毛细管柱35cm?50?m,有效长度30cm压力进样：13.8kPa?4s；分离电压15kV紫外检测210nm；分离柱温25?C第37页，共62页，星期日，2025年，2月5日*讨论采用HDB作添加剂使形成双动态涂层，反转电渗流，采用正极检测，大大缩短分析时间在20mmol/LTris-H3PO4(pH3.0)条件下，HDB含量0.1g/L，SO3-?-CD20mmol/L，氟西汀和西替利嗪对映体在较短的时间内达到良好分离pH2时石英毛细管壁的硅羟基不解离，即使加入HBD也无法形成双动态吸附。当pH增加到3时，硅羟基发生解离后而带负电，带正电的HBD通过静电作用在柱内形成第一动态涂层，而后再静电吸附一层负电性的SO3-?-CD，双动态吸附的形成导致分析物R值的增大第38页，共62页，星期日，2025年，2月5日*例梯度加压毛细管电色谱同时分离大黄提取液中5种蒽醌类化合物毛细管电色谱主要是以电驱动流动相为主要的分离模式，而压力流驱动毛细管电色谱是以液相色谱泵为流动相的主要驱动力，它克服了仅靠电渗流驱动的一些限制因素，可方便地对流动相的组成、性质和流速进行调节，尤其是能够实现流动相梯度洗脱，是毛细管电色谱法发展的重要方向第39页，共62页，星期日，2025年，2月5日*色谱条件C18熔硅毛细管柱（27cm?75?m），有效长度20cm流动相A组成：醋酸-醋酸钠缓冲溶液(pH=4.5)；流动相B组成：乙腈流动相流速0.08mL/min进样阀定量进样20nL在260nmUV柱上检测-3kV电压下，大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素和大黄酸5种成分得到最好分离效果第40页，共62页，星期日，2025年，2月5日*A?E为5种梯度（不加电压）在上述C梯度条件下，改变电压最佳