ZmWRKY70调控ZmB12D应答玉米水淹胁迫的分子机制研究.pdf

目录

目录I

摘要IV

ABSTRACTVI

1文献综述1

1.1水淹胁迫对植物的影响1

1.1.1水淹胁迫对植物根系的影响1

1.1.2水淹胁迫对植物地上部分的影响1

1.1.3水淹胁迫对植物代谢的影响2

1.2植物对水淹胁迫的适应机制4

1.2.1形态结构的适应4

1.2.2代谢适应5

1.3WRKY转录因子研究进展6

1.3.1WRKY转录因子的结构特征6

1.3.2WRKY转录因子参与植物生长发育调控7

1.3.3WRKY转录因子参与植物应答生物胁迫9

1.3.4WRKY转录因子参与植物应答非生物胁迫9

1.4植物B12D基因研究现状11

1.5选题的目的及意义12

2材料与方法13

2.1实验材料13

2.1.1植物材料13

2.2.2载体与菌株13

2.2.3酶与试剂14

2.2.4实验所用仪器与设备14

2.2实验方法15

2.2.1蛋白序列分析15

2.2.2植物叶片RNA提取和cDNA的合成15

2.2.3载体构建16

2.2.4植物生长条件18

2.2.5玉米叶肉原生质体制备与转化19

2.2.6亚细胞定位19

2.2.7转录激活活性分析20

2.2.8拟南芥的稳定转化20

2.2.9玉米幼胚遗传转化21

2.2.10实时定量PCR（RT-qPCR）21

2.2.11蛋白质印迹（westernblot）实验21

2.2.12酵母单杂（Y1H）实验23

2.2.13双荧光素酶（D-LUC）报告实验23

2.2.14植株表型分析23

2.2.15植株生理生化指标分析24

2.2.16数据分析24

3结果与分析25

3.1ZmWRKY70正调控拟南芥和玉米水淹胁迫耐受性25

3.1.1鉴定ZmWRKY70基因25

3.1.2ZmWRKY70亚细胞定位分析26

3.1.3ZmWRKY70转录激活活性分析27

3.1.4ZmWRKY70基因拟南芥过表达植株鉴定27

3.1.5ZmWRKY70基因拟南芥过表达植株水淹胁迫耐受性分析28

3.1.6ZmWRKY70基因拟南芥过量表达植株中低氧响应基因的表达量

检测30

3.1.7过量表达ZmWRKY70基因的玉米叶肉原生质体中低氧胁迫响

应基因的表达量检测31

3.1.8ZmWRKY70基因玉米过量表达植株鉴定32

3.1.9过量表达ZmWRKY70基因的玉米植株水淹胁迫耐受性分析.32

3.1.10水淹胁迫下ZmWRKY70转基因玉米生理生化指标分析33

3.2ZmWRKY70正调控ZmB12D基因的表达34

3.3ZmB12D正调控拟南芥对水淹胁迫的耐受性37

3.3.1ZmB12D基因序列分析37

3.3.2ZmB12D基因表达模式分析37

3.3.3ZmB12D亚细胞定位分析38

3.3.4ZmB12D转基因拟南芥植株的鉴