《猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞免疫检测技术规范（MHC-肽四聚体）（征求意见稿）》.docx

ICS11.220CCSB41

江苏省地方标准

DBXX/TXXXX—XXXX

猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞免疫检测技术规范（MHC-肽四聚体）

CellularimmunoassaysforPorcineReproductiveandRespiratorySyndromevirus

(MHC-peptidetetramer)

（征求意见稿）

在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

江苏省市场监督管理局发布

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目次

前言 I

1范围 2

2规范性引用文件 2

3术语、定义和缩略语 2

4原理 4

5试剂及仪器 4

6检测 4

7最终结论判定 6

附录A猪PBMC制备所需试剂和材料 7

附录B流式细胞术检测所需试剂和材料 8

附录C检测所需仪器 9

附录D检测所需试剂配置 10

附录E阴性对照制备 11

附录F阳性对照制备 12

I

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前言

为规范猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞免疫检测技术规范（MHC-肽四聚体），特制定本标准。

本文件按GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由江苏立华牧业股份有限公司提出。

本文件由江苏省畜牧业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：江苏立华牧业股份有限公司、江苏省农业科学院、立华南京农业产业研究院有限公司。

本文件起草人：张海涛、张雪寒、罗燕、李彬、张双玉、尹丽萍、丁小燕、赵永祥。

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猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞免疫检测技术规范

（MHC-肽四聚体）

1范围

本文件规定了猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞免疫检测技术（MHC-肽四聚体）的试剂及仪器、检测方法、质量控制和结果判定等。

本文件适用于猪繁殖与呼吸综合征病毒的疫苗免疫效力评价、猪群驯化效果评估和病毒感染的早期诊断。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682

分析实验室用水规格和试验方法

GB19489

实验室生物安全通用要求

GB/T18090—2023

猪繁殖与呼吸综合征诊断方法

GB/T39730—2020

细胞计数通用要求流式细胞测定法

3术语、定义和缩略语

下列术语和定义适用于本文件。

3.1术语和定义

3.1.1细胞染色cellstaining

细胞特定成分与荧光染料或标记了荧光染料的特异性抗体结合后进行检测的一种技术。注：特定成分为蛋白质、DNA、RNA。

3.1.2主要组织相容性复合体majorhistocompatibilitycomplex,MHC

MHC是一组编码动物主要组织相容性抗原的基因群的统称。MHC分子在免疫系统中起着识别和呈递抗原肽的作用。

3.1.3猪白细胞抗原swineleukocyteantigen,SLA

猪的MHC在遗传学中被称为SLA，SLA-I类分子介导细胞免疫应答，其基因是重链(α链）与轻链β2微球蛋白(β2m）以非共价结合而构成的糖蛋白，其α链具有多态性，但β2m是单态的。SLAI类分子的α链、β2m及病毒多肽在细胞内可以形成复合体，递呈到细胞表面被CD8+T淋巴细胞受体识别，引起CTL免疫应答，有利于机体清除病毒，抵抗疾病。

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3.1.4肽peptide

由氨基酸组成的短链蛋白质分子。在MHC肽四聚体技术中，特定长度的抗原肽（9-15个氨基酸）与MHC分子结合形成复合物。

3.1.5四聚体tetramer

由四个相同的单体分子组成的结构。在MHC-肽四聚体技术中，通过将MHC分子与特定抗原肽结合，形成四聚体结构，使用流式细胞仪分析特定抗原肽与T细胞受体的相互作用。通过结合特定T细胞亚群和荧光信号的检测，定量测定与MHC-肽四聚体结合的T细胞比例。

3.1.6外周血单个核细胞peripheralbloodmon