高效液相色谱法教学.ppt

反相色谱保留机理两种观点:①疏溶剂理论（溶质与极性溶剂疏远）②双保留机理（残留羟基）第94页，共167页，星期日，2025年，2月5日影响溶质保留的因素①流动相组分的保留随流动相极性的减少而减少,lnk’?H2O%,有机溶剂%增大,极性下降,k’值随之下降。思考：在ODS柱上，用70%甲醇/水或60%甲醇/水洗脱苯系物，哪一种流动相使苯系物的保留值大，为什么？第95页，共167页，星期日，2025年，2月5日②键合固定相：a.烷基覆盖量增加，k’值随之增大。b.烷基链长增加,k’值随之增大。思考：同样是70%甲醇流动相，苯在C18比C8柱上的保留值大，为什么？第96页，共167页，星期日，2025年，2月5日③溶质●非离子化合物：极性大,k’值小●非极性化合物：分子表面积大,k’值大●同系物：链长增大,k’值增大●苯系物：环数增大,k’值增大;●若化合物的非极性部分相同,极性官能团增加,则k’值下降●几何异构体：能形成内氢键的异构体的化合物k’值大。第97页，共167页，星期日，2025年，2月5日碳链增大疏水性增大保留越大流动相极性增大，保留增大第98页，共167页，星期日，2025年，2月5日反相色谱中流动相选择水＋有机改善剂常用：甲醇、乙腈、四氢呋喃、二氧六环极性：有机改善剂＜水洗脱能力：有机改善剂＞水极性顺序：甲醇＞乙腈＞二氧六环＞四氢呋喃洗脱能力：水＜甲醇＜乙腈＜二氧六环＜四氢呋喃第99页，共167页，星期日，2025年，2月5日反相键合相色谱的优点：①流动相可选用水溶性ⅰ样品的溶解度范围提高ⅱ流动相可变性大ⅲ柱重现性好②固定相表面化学能低ⅰ平衡容易ⅱ梯度洗脱③固定相选择多④固定相耐溶剂冲洗⑤热稳定性好第100页，共167页，星期日，2025年，2月5日缺点：①流动相PH范围要控制（PH＝2－8）pH太低：Si-C键易断裂pH太高：硅胶基质易溶解②游离的硅羟残基影响分离（封尾）P328-331第101页，共167页，星期日，2025年，2月5日思考烷基苯同系物分离分析多环芳烃分离分析出峰顺序？如何选择色谱条件？如何优化分离？第102页，共167页，星期日，2025年，2月5日第四章、离子交换色谱，离子对色谱离子交换色谱：适用于离子型物质的分离和分析§4-1离子交换色谱一.原理：用离子交换剂作固定相，以具有一定pH值的缓冲溶液作流动相，样品中各离子依据它们与离子交换剂的交换能力大小来进行分离的色谱方法。第103页，共167页，星期日，2025年，2月5日原理：

流动相(溶质离子)+离子交换剂(反离子)Ｒ－Ａ＋Ｂ≒Ｒ－Ｂ＋Ａ平衡时，平衡常数为第104页，共167页，星期日，2025年，2月5日

控制k’可以改变流动相的离子强度

注：只有当溶质呈离子状态时，才能在离子

交换柱上有保留

(流动相pＨ和溶质ＰＫａ都是很重要的参数)第105页，共167页，星期日，2025年，2月5日二、离子交换剂

阳离子交换剂——带负电荷官能团

-SO3-(磺酸型）、-COO-(羧酸型）

阴离子交换剂——带正电荷官能团

－NH3＋（氨基型）、－NR3＋（季胺型）常见：硅胶为基体的键合相离子交换剂例第106页，共167页，星期日，2025年，2月5日pH对交换容量的影响：①强酸、强碱性离子交换剂，交换性能不受pH影响，交换容量恒定。②弱酸性阳离子交换剂，在较高pH条件下弱碱性阴离子交换剂，在较低pH条件下发生离子交换pH与交换容量关系图第107页，共167页，星期日，2025年，2月5日三、离子交换色谱的影响因素①流动相PH的影响例：弱酸：HA≒H++A-PH↓→[A-]↓→交换能力↓→tR↓PH↑→[A-]↑→交换能力↑→tR↑弱碱：-NH2+H+≒-NH3+PH↓→[NH3+]↑→交换能力↑→tR↑PH↑→[NH3+]↓→交换能力↓→tR↓对分离不同PKa的酸碱是个有利因素例第108页，共167页，星期日，2025年，2月5日②流动相中反离子的形式和浓度交换平衡常数KB/A：反映了溶质