毛细管电泳和超临界流体色谱法.pptVIP

第六章毛细管电泳和超临界流体色谱法毛细管电泳毛细管电泳的概述；毛细管电泳的理论；毛细管电泳的仪器系统；毛细管电泳的应用。第六章毛细管电泳和超临界流体色谱法超临界流体色谱法；超临界流体色谱法的概述；超临界流体色谱法的速率理论；超临界流体色谱法的仪器；超临界流体色谱法的应用。毛细管电泳(Capillaryelectrophoresis,CE)的历史：1981年JorgensonLukacs用75μm的毛细管柱分离了丹酰化氨基酸，40万理论塔板数/m。电泳是指电介质中带电粒子在电场作用下以不同速度向电荷相反方向迁移的现象，利用这种现象对物质进行分离分析的方法称之电泳法。概述第一节毛细管电泳第一节毛细管电泳HPEC高效毛细管电泳第一节毛细管电泳四色荧光标记－毛细管电泳DNA测序柱效高，可达105～106理论塔板数/m；高效特点：分离速度快；快速几乎不消耗溶剂，样品用量少，仅为几十纳升，仪器成本也低；低耗选择性大，可根据不同的分子性质对生物大分子、药物等极广泛的分离对象进行有效的分离。灵敏第一节毛细管电泳第一节毛细管电泳4、分类名称缩写管内填充物说明毛细管区带电泳CZEpH缓冲的自由电解质溶液，可含有一定功能的添加剂。属自由溶液电泳型，但可通过加添加剂引入色谱机理。胶束电动毛细管色谱MECCCZE载体＋带电荷的胶束CZE扩展的色谱型微乳液电动毛细管色谱MEECC由缓冲液、不溶于水的有机溶剂和乳化剂构成的微乳液。CZE扩展的色谱型毛细管凝胶电泳CGE各种电泳用凝胶或其他筛分介质。属非自由溶液电泳，含有“分子筛”效应。毛细管等电聚焦CIEF建立pH梯度的两性电解质按等电点分离，属电泳型，要求完全抑制电渗流动。毛细管电动色谱CECCEZ载体＋液相色谱固定相属非自由溶液色谱型非水毛细管电泳NACE含有电解质的非水体系属自由溶液电泳型第一节毛细管电泳毛细管电泳的理论基础电泳和电泳淌度E为电场强度；mep为溶质的淌度（溶质在给予缓冲液中单位时间和单位电场强度下移动的距离）。e和h分别为介质的介电常数和黏度，zi是粒子的Zeta电势，Zeta电势和粒子的表面电荷成正比，和粒子分子量成反比。第一节毛细管电泳电渗和电渗率表观淌度和权均淌度mos为电渗率；uos为电渗速度；zos为管壁的Zeta电势uap为表观迁移速度，分离后出峰次序为：正离子中性分子负离子。第一节毛细管电泳kp为容量因子；np和ns分别为样品在P相（在毛细管中引入另一相，如胶束、高分子团等准固定相或色谱固定相等，称为P相）和溶剂中的分子数；mp为P相的表观淌度。第一节毛细管电泳4、分离效率与谱带展宽柱效和塔板高度，Ld为进样口到检测器的距离。毛细管电泳只有纵向扩散项，时电驱动的扁平流型系统自热：扩散与吸附：E为电场强度，kV/m；c为介质浓度，mol/l；d为管径，mm。第一节毛细管电泳分离度：将淌度相近的组分分开的能力。与外加电压V；有效柱长与总长度之比（Ld/L）；电泳有效淌度差（Δmef）；电渗淌度（mos）有关。高压电源毛细管柱进样（电动/压力/扩散）检测器三、毛细管电泳仪器设备1四、应用蛋白质2第一节毛细管电泳1958年，JamesLovelock首次提出设想。1962年，Klesper第一篇关于用超临界流体二氯二氟甲烷和二氯二氟甲烷作的流动相，分离镍卟啉异构体。1966年正戊烷为流动相，分析多环芳烃、染料和环氧树脂。1968年，Gidding等以CO2和氨为流动相，分析核苷、糖、氨基酸、甾醇、类固醇、类胡萝卜素等。1981年NovotayLee毛细管柱超临界流体色谱（Supercriticalfluidchromatography,SFC）。才完善技术。第二节超临界流体色谱法概述第二节超临界流体色谱法1、超临界流体（Supercriticalfluid,SF）传质阻力小，可得到快速高效的分离；在较低温度下，可分析热不稳定性和分子量大的物质，同时还能增加柱子的选择性；流体的密度可改变流体的性质。特点：1）与GC比，溶解度增大，分离难挥发样品效果好。2）与HPLC相比，扩散系数大，分离度增加。3）黏度低于液体，柱压降低，每米理论板数提高。4）密度：溶解度、扩散系数和黏度都是密度的函数，可改变密度来实现，如程序升压等。第二节超临界流体色谱法2、SFC与GC、LC的比较SFCGCLC流动相选择性流动相和固定相的函数固定相的函数流