湖南省某医院耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌分子流行病学特征分析 .pdf

湖南省某医院耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌分子流行病

学特征分析

【摘要】分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌carbapenem-resistantKlebsiell

apneumoniae,CRKP)分子流行病学及探讨blaKPC和blaNDM水平传播机制，为

预防和治疗CRKP提供参考依据。回顾性分析2022年1—12月湖南中医药大学第

一附属医院临床非重复分离的CRKP,共计49株。采用改良碳青霉烯灭活实验m

CIM)、EDTA-碳青霉烯灭活实验eCIM)进行表型筛选；聚合酶链式反应PC

R)检测CRKP碳青霉烯耐药基因、8内酰胺酶耐药基因和毒力基因；多位点序列

分析检测CRKP菌株的同源性。通过接合试验，推断blaKPC和blaNDM两种碳青

霉烯耐药基因的水平传播机制。结果显示，本研究共收集到CRKP49株，有44

株携带blaKPC,8株携带blaNDM,其中同时携带blaKPC和blaNDM两种耐药基

因的CRKPblaKPC+blaNDM-CRKP)有3株。28株CRKP携带毒力基因28/49,

57.2%),1株CRKP拉丝试验阳性，且同时携带Aerobactin和rmpA两种毒力基

因。共检出5种ST型，以ST11为主41/49,83.7%)。3株blaKPC-CRKP均

接合成功，3株blaNDM-CRKP仅1株接合成功，接合子菌株对亚胺培南以及头

泡菌素类抗菌药物的敏感性均显著降低。综上，本研究CRKP耐药机制主要以产

KPC酶为主，且同时携带多种8-内酰酶耐药基因，并有高毒力耐碳青霉烯肺炎

克雷伯菌highvirulencecarbapenem-resistantKlebsiellapneumoniae,

hv-CRKP)和blaKPC+blaNDM-CRKP的局部流行。blaKPC和blaNDM可通过质粒

水平传播，不同菌株的水平传播效率存在差异。

【关键词】耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌；高毒力耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌;

ay,eCIM)试验：在2mlTSB肉汤中加20ti10.5mmol/L的乙二胺四乙酸Ethy

leneDiamineTetraacetieAcid,EDTA)溶液，其余操作同mCIM试验。eCIM

结果判读：当mCIM结果为阳性，且eCIM试验纸片与H1CIM试验纸片的抑菌圈直

径相比N5IHIH,该菌株产金属酶。当H1CIM结果为阳性，且eCIM试验纸片与H1CIM

试验纸片的抑菌圈直径相比4mm,该菌株产丝氨酸酶。

4.拉丝试验：取哥伦比亚血琼脂平板上经18、24h培养的单个菌落，用一次

性接种环挑起并轻柔向外牵拉，测量接种环与菌落间黏液丝的长度。长度日5颇

为拉丝试验阳性，不能拉丝或长度小于5nnii为拉丝试验阴性。拉丝试验阳性表明

该菌株为高毒力肺炎克雷伯菌[9]o

5,肺炎克雷伯菌毒力基因检测：煮沸法提取DNA模板，PCR检测CRKP常见

毒力基因，包括nnpA、magA、AerobactinallSkfUiroN,引物设计参考

文献[10],反应参数见表1。PCR反应体系为20U1,其中Taq酶10uL

dNTP0.8u1,DNA模板0.6u1,ddH2O8.6u1。扩增产物用1.5%琼脂糖凝

胶电泳分析并送北京睿博兴科生物有限公司测序，结果与BLAST数据库进行比对。

表1肺炎克雷伯菌毒力基因引物序列及退火温度与产物大小

引物名称引物序列5-3退火温度(°C)产物大小(bp)

rmpAF:ACTGGGCTACCTCTGCTTCA53535

R:CTTGCATGAGCCATCTTTCA

magAF:GGTGCTCTTTACATCATTGC531282

R:GCAATGGCCATTTGCGTTAG

Aerobactin