法医DNA分型课件课件.pptVIP

DNA指紋的優缺點最顯著的特點是具有很高的鑒別能力，其雜交圖譜顯示出多條個體特異譜帶，即使只使用一種探針，也可根據雜交圖譜準確判定兩份樣本是否來源於同一個體。對檢材要求較高，不能分析降解的DNA，判讀和結果解釋比單位點探針困難。4.2DNA紋印(DNAProfile)原理與DNA指紋類似不同之處在於探針序列,序列中含有不重複序列,以定位某一個具體位點DNA紋印原理DNA指紋原理一例案件的DNA紋印圖譜單位點探針只能與DNA分子上的單一位點雜交，純合時出現一條雜交帶，雜合時出現兩條帶，故個人識別能力不如多位點探針。為了提高單位點探針的鑒別能力，可以用兩種或兩種以上的單位點探針對同一份檢材進行檢測。DNA紋印優點：①圖譜容易判讀，每個單位點探針只能檢出1—2條帶。DNA紋印優點：①圖譜容易判讀，每個單位點探針只能檢出1—2條帶。②用單位點探針很容易瞭解到DNA指紋圖上的雜交帶來自哪一個位點，便於統計分析。DNA紋印優點：①圖譜容易判讀，每個單位點探針只能檢出1—2條帶。②用單位點探針很容易瞭解到DNA指紋圖上的雜交帶來自哪一個位點，便於統計分析。③易於分析混合斑的DNA樣品。多位點探針所得的雜交圖譜上的條帶較多，如果兩個或兩個以上的樣品混合在一起(在兇殺、強姦、輪奸等案件中常出現這種情況)，所得的雜交圖譜上的條帶更複雜，難以分析結果。而用單位點探針檢測時，因每一樣品最多只出現兩條雜交譜帶，對於混合樣品檢測結果的分析就顯得較為方便。DNA紋印優點：①圖譜容易判讀，每個單位點探針只能檢出1—2條帶。②用單位點探針很容易瞭解到DNA指紋圖上的雜交帶來自哪一個位點，便於統計分析。③易於分析混合斑的DNA樣品。多位點探針所得的雜交圖譜上的條帶較多，如果兩個或兩個以上的樣品混合在一起(在兇殺、強姦、輪奸等案件中常出現這種情況)，所得的雜交圖譜上的條帶更複雜，難以分析結果。而用單位點探針檢測時，因每一樣品最多只出現兩條雜交譜帶，對於混合樣品檢測結果的分析就顯得較為方便。④可分析部分降解的DNA，能檢測分子量較小的DNA片段(1-4kb)，而多位點探針所檢測的DNA片段通常在4-24kb之間，若DNA片段小於4kb一般不能檢測。三、STR位點的分析：PCR方法（PolymeraseChainReaction,聚合酶鏈式反應)3.1PCR的基本原理在體外條件下，利用DNA聚合酶的催化作用，以靶DNA作為範本，由一對引物引導DNA合成，使兩引物間的靶DNA片段得到特異性的擴增。其擴增產物的特異性是由引物的序列所決定的。DNA變性引物結合延伸一次擴增結果二次擴增………↓↓↓↓↓3.1PCR的基本原理在體外條件下，利用DNA聚合酶的催化作用，以靶DNA作為範本，由一對引物引導DNA合成，使兩引物間的靶DNA片段得到特異性的擴增。其擴增產物的特異性是由引物的序列所決定的。所謂引物(primer)是由DNA合成儀人工合成的與待擴增的DNA片段兩翼互補的寡核苷酸片段(由幾個或幾十個堿基組成)。3.1PCR的基本原理在體外條件下，利用DNA聚合酶的催化作用，以靶DNA作為範本，由一對引物引導DNA合成，使兩引物間的靶DNA片段得到特異性的擴增。其擴增產物的特異性是由引物的序列所決定的。所謂引物(Primer)是由DNA合成儀人工合成的與待擴增的DNA片段兩翼互補的寡核苷酸片段(由幾個或幾十個堿基組成)。在進行PCR時，DNA的合成只能在兩引物之間沿待擴增的DNA範本進行，從而得到兩條與範本DNA序列完全互補的DNA新鏈。3.2PCR的反應過程將耐熱DNA聚合酶（通常使用的是TaqDNApolymerase）、引物、去氧核糖核苷酸（包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP）、待擴增的範本DNA及提供最佳反應條件的緩衝系統等按照適當的比例混合組成的反應體系裝於擴增管中。通過DNA擴增儀以不同的溫度迴圈進行擴增。每個迴圈週期一般包括三個基本步驟：①範本DNA變性：即在940—960C高溫下使範本DNA發生熱變性，打開DNA雙鏈。每個迴圈週期一般包括三個基本步驟：①範本DNA變性：即在940—960C高溫下使範本DNA發生熱變性，打開DNA雙鏈。②退火：降低溫度(50-600C)使引物與範