实验二-孚尔根核染色.pptVIP

医学遗传学实验实验2洋葱根尖孚尔根染色法实验目的实验原理实验方法注意事项实验作业思考问题01掌握孚尔根核染色的方法。02了解孚尔根染色的原理。实验目的Na2S2O3+HCl→→亚硫酸根01亚硫酸根+碱性品红→无色的亚硫酸品红—Schiff试剂01DNA在60℃，1mol/LHCl作用下，核酸中的嘌呤碱很快完全除掉，脱氧核糖中潜在的的醛基获得自由状态，水解条件下形成半缩醛羟基，与Schiff试剂反应，形成紫红色化合物。01实验原理孚尔根核染色法是Feulgen和Rossonbek于1924年提出的鉴定细胞中DNA的组织化学方法。其优点是制片清洁、染色体清晰、组织软化好，易于压片。但对小型染色体（如玉米、水稻）效果较差。STEP1STEP2STEP3STEP4水洗：把已经固定好的洋葱根尖用50％乙醇和清水分别冲洗,再把它放入室温的1mol/LHCl中处理2-3min。将根尖换入60℃预热的HCl，置于恒温水浴中，在60?0.5℃的条件下水解10min。吸出热HCl，换入室温1mol/LHCl再处理2min，然后水洗2-3次。吸净水分，加入Schiff试剂，盖上盖子，黑暗条件下染色30min或过夜。实验方法小心倒出Schiff试剂,然后用漂洗液洗3次。漂洗液配置方法：取10ml10%亚硫酸氢钠母液，加200ml蒸馏水，再加10ml1NHCL，即成漂洗液，使用前配置。蒸馏水漂洗后取根尖置于载玻片上，只保留分生区，再加一滴45%的醋酸，压片镜检。固定与固定液固定：将新鲜的活组织从生物体取下后，立即投入固定剂中，借助化学药品的作用，使细胞保持原有形态结构的一种手段。迅速防止细胞的死后变化，防止自溶、腐败，尽量保持生长状态结构。01使细胞中的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持生前状态。02使组织内各种物质成分产生不同的折射率，便于鉴定、观察。03使不同组织成分对染料有不同的亲和力，便于染色。04防止细胞过度收缩或膨胀，失去原有的形态结构。05固定的目的预处理的目的及方法目的：改变细胞质粘度，破坏和抑制纺锤体的形成，使染色体适度缩短和分散。方法：0.04-0.2%秋水仙素溶液2-4小时。对二氯苯饱和溶液3-5小时。0.002M(或0.03%)8-羟基喹啉1.5-2小时以上，室温。低温：1-4℃处理24小时。根尖形态与结构HEXIUNIVERSITY根冠分生区伸长区成熟区Schiff试剂小心取放，及时清洗吸取Schiff试剂的吸管。01黑暗条件下染色。02注意事项实验作业绘制你所观察到的图象，并说明是有丝分裂的哪一个时期，并注明放大倍数。