关于植物组织培养的基本技术课件.pptVIP

外植体种类及基因型单子叶植物不易诱导器官发生。b.木本植物较难诱导。c.存在基因型差异（如番茄29%~63%）d.开始生长季节取材容易诱导。外植体状态：外植体大小：外植体越小成苗能力越弱，较大的外植体增殖较快。外植体极性：当外植体以形态学的基部接种于培养基上时，从远离基部的表面诱导出芽、苗数目较多。B、培养基a培养基类型:b碳源的影响:C、植物生长调节物质a细胞分裂素和生长素类b赤霉素类c乙烯及其生物合成抑制剂d其他有机化合物细胞分裂素和生长素：a.部分植物单独使用细胞分裂素（CTK）可以形成无根苗b.部分植物无根苗的形成需要细胞分裂素和生长素配合使用。c.外源CTK与生长素必须维持适当比例以改变内源激素平衡，促进器官发生。d.不同细胞分裂素对分化的作用效果不同e.苯基脲衍生物具有较高的细胞分裂素活性（4PU、CPPU、TDZ）赤霉素类：组织培养条件下只在少数植物上对芽的诱导有促进作用。如马铃薯、甜菜、樱桃等。乙烯及其生物合成抑制剂：具有促进和抑制两方面的影响，但抑制作用多于促进作用。因此在某些植物种类，乙烯抑制剂可以促进芽的形成。AgNO3、CoCl、AVG其他有机化合物：腺嘌呤衍生物具有促进器官分化作用。椰子汁等物质也具有促进分化的功能。3.培养条件及其他因素（1）光照通常1000~5000Lx16小时光照。非洲菊1000lx，洋葱16小时，马铃薯连续光照，葡萄要求短日照。光质也影响芽的再生，蓝光有利于器官发生，烟草实验，而红光有利于根的发生。（2）温度：大部分植物要求25oC，少数要求较低温度（15~20oC）或较高的温度（30oC）如菖蒲、水仙、洋葱、龟背竹等。变温处理对有些植物器官发生有促进作用，如豌豆。（3）湿度：培养室相对湿度以70％－80％为适宜，培养容器内要保持适宜湿度，防止过于干燥或湿度过大。（4）气体：要注意保持培养容器内良好的通气性。维持适宜的氧气和二氧化碳浓度，防止有害气体的积累。如何进行外植体的起始培养（无菌体系的建立）？1、选择适宜的外植体；2、选择适宜的培养基；3、创造适宜的环境条件感谢大家观看高有利于根的形成和愈伤组织生长素/细胞分裂素适中有利于根芽的分化低有利于芽的形成生长调节物质的使用甚微，一般用mg／L表示浓度。一般生长素浓度的使用为0.05～5mg／L，细胞分裂素0.05～10mg／L。培养体支持材料1.琼脂A用量7－10g/LB新买应试凝固力2.其它玻璃纤维滤纸桥海绵等▲辅助性物质抗生素抗氧化物活性炭天然复合物▲1.常用种类：青霉素链霉素庆大霉素等2.用量：5－20%3.注意：抗生素对组织生长有抑制作用，使用要慎重抗生素抗氧化物常用抗氧化剂及使用：半胱氨酸、VC（50－200mg/L液洗涤外植体伤口表面）。活性炭1.作用：具吸附作用；茎尖初代培养可防褐化；促进新梢增殖（浓度0.1-0.2%）；促进生根；防止组培苗玻璃化（浓度0.3%）。利于胚胎培养。2.常用浓度：0.5-10g/L3.注意：活性炭具副作用。▲椰乳：一般使用浓度在100～200ml／L它在愈伤组织和细胞培养中有促进作用。在马铃薯茎尖分生组织和草莓微茎尖培养中起明显的促进作用。香蕉：用量为100～200ml／L。用黄熟的小香蕉，加入培养基后变为紫色。对pH值的缓冲作用大。主要在兰花的组织培养中应用，对发育有促进作用。马铃薯(potato)：去掉皮和芽后，加水煮30min，再经过过滤，取其滤液使用。用量为150～200g／L，对pH值缓冲作用也大，添加后可得到健壮的植株。水解酪蛋白：为蛋白质的水解物，主要成分为氨基酸，使用浓度为100～200mg／L。受酸和酶的作用易分解，使用时要注意。天然复合物培养基种类MS培养基B5培养基White培养基N6培养基KM-8P培养基基本培养基二、培养基的类型：N6培养基特点：成分简单KNO3和(NH4)2SO4含量高适合花药培养★White培养基特点：无机盐量较低，适合生根培养B5