中药制剂高效液相色谱法—高效液相色谱法的操作规范.pptx

中药制剂含量测定技术——高效液相色谱法的操作步骤

案例导入固本咳喘片中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定本品是由党参、白术（麸炒）、茯苓、麦冬、盐补骨脂、炙甘草、醋五味子加工而成的片剂采用高效液相色谱法进行含量测定，本品中含补骨脂的量以补骨脂素和盐补骨脂素的含量计算测定前先要进行色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1mol/L磷酸氢二钠溶液45：55为流动相；检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素峰计算应不低于2000

高效液相色谱仪应该如何操作?案例导入固本咳喘片中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定色谱条件与系统适用性试验包含了哪些内容？进行这项试验有何意义？

中药制剂含量测定技术——高效液相色谱法一、概述高效液相色谱法（HPLC）是采用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱中进行分离并测定含量的方法

高效液相色谱仪一般由高压输液系统、进样系统、色谱系统、检测系统和数据分析处理系统共同组成中药制剂含量测定技术——高效液相色谱法

测定前：色谱条件与系统适用性试验中药制剂含量测定技术——高效液相色谱法色谱条件一般包括填充剂（固定相）、流动相、检测波长、洗脱方式等系统适用性试验通常包括理论板数、分离度、灵敏度、拖尾因子和重复性等参数二、高效液相色谱仪的操作步骤其中理论板数、分离度都是色谱柱柱效的评价因素例：复方丹参片含量测定理论板数按丹参酮ⅡA峰计算应不低于2000

中药制剂含量测定技术——高效液相色谱法（1）用流动相冲洗滤器，再把过滤头浸入流动相中，启动泵开关1.泵的操作（2）打开泵的排放阀，用冲洗键(PURGE)进行泵排气，一般约需3分钟，然后关闭排放阀（3）将流速调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，初始平衡时间一般需约30分钟

中药制剂含量测定技术——高效液相色谱法（1）开启检测器电源开关，选择光源，选定检测波长，待稳定后，测试参比和供试品光路的信号应符合要求2.检测器和色谱工作站的操作（2）开启色谱工作站，设定处理方法，初步设定电压范围、时间范围等参数（3）记录基线，待基线稳定后方能进行后续操作

中药制剂含量测定技术——高效液相色谱法（1）调节进样手柄置于采样位置(LOAD)3.进样操作-六通阀式进样器（手动进样器）（2）用待进样溶液清洗配套的微量注射器，再用注射器抽取适量溶液，排除气泡（3）把注射器的平头针直插至进样器底部，注入待测溶液，整个过程注射器不应取下（4）将进样器手柄转至进样位置(INJECT)，此时样品溶液被流动相带入色谱柱

中药制剂含量测定技术——高效液相色谱法（1）将待测溶液用0.45μm滤膜滤过，取续滤液至进样瓶中，盖上带有垫片的瓶盖，顺时针方向旋紧3.进样操作-自动进样器（2）将样瓶依次放入贮样室内，记录样瓶位置号（3）对自动进样器进行检查校正，使自动进样器为默认位置，检查进样针冲洗系统是否正常、管路内是否无气泡、是否具有足够的冲洗液和流动相（4）设定自动进样参数，包括供试品溶液自动进样的起始位置、进样体积、数据文件名等

中药制剂含量测定技术——高效液相色谱法（1）进样的同时启动色谱工作站，开始采集和处理色谱信息4.色谱数据的收集和处理（2）组分的最后一峰出完后应继续走一段基线，确认再无组分流出后方能结束（3）含量测定的对照品溶液和供试品溶液每份至少进样2次，由全部进样结果(n≥4)求得平均值，相对标准偏差(RSD)不应大于1.5％（4）色谱条件和系统适用性试验应符合《中国药典》2020年版通则规定

中药制剂含量测定技术——高效液相色谱法（1）分析完毕，先关检测器和色谱工作站，再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，各种冲洗剂一般冲洗15-30分钟5.清洗和关机（2）冲洗完毕后逐步降低流速至0，关泵。进样器也应用相应溶剂冲洗，可用进样阀所附专用冲洗接头（3）关闭电源，作好使用登记，内容包括日期、检品、色谱柱、柱压、使用时间以及仪器使用前后的状态等

中药制剂含量测定技术——高效液相色谱法（1）进样前色谱柱应用流动相充分冲洗平衡，如系统适用性不符合规定，或填充柱已损坏，则应更换色谱柱再进行分析操作注意事项（2）以硅胶为载体的化学键合相的稳定性受流动相pH值的影响，使用时应注意在规定的pH值范围内选择流动相，一般pH值范围在2.5-7.5（3）色谱流通系统从泵、进样器、色谱柱到检测器流通池，在分析完毕后均应充分冲洗，特别是使用过含盐流动相的，更应该注意先用水，再用甲醇-水或乙腈-水充分冲洗

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