转基因动物制备的方法.ppt

优点：受精卵携带外源基因的阳性率高外源基因多单拷贝整合操作简单，避免注射法对卵子的损害宿主范围广可同时感染大量胚胎，感染率及胚胎存活率高。第31页，共44页，星期日，2025年，2月5日关于转基因动物制备的方法第1页，共44页，星期日，2025年，2月5日第2页，共44页，星期日，2025年，2月5日第3页，共44页，星期日，2025年，2月5日第4页，共44页，星期日，2025年，2月5日第5页，共44页，星期日，2025年，2月5日1转基因动物的概念转基因动物就是指用试验的方法将人们所需要的外源基因导入到动物体内,使这种外源基因与动物本身的染色体整合在一起,这样外源基因就能随着细胞的分裂而增殖,在动物体内得到表达,并且能够稳定遗传给后代的动物。第6页，共44页，星期日，2025年，2月5日转基因动物自产生以来,随着研究的不断深入,近些年来得到了迅速的发展。由于它打破了自然繁殖中的种间隔离,使基因能在种系关系很远的机体间流动,实现了动物种间遗传物质的交换与重组,这不仅为遗传物质的研究提供了新的手段,丰富了物种的基因库,而且扩大了生命科学的视野。第7页，共44页，星期日，2025年，2月5日转基因动物是动物基因工程在医学生物学研究中的突出成果。近十年来，为分子遗传学、发育生物学、医学遗传学、肿瘤研究及优良经济动物的开发研究等多方面做出了很大的贡献。第8页，共44页，星期日，2025年，2月5日Gordon等人首次成功地将含有HSV和SV40DNA片段的重组质粒DNA以显微注射法导入小鼠受精卵的雄原核内，得到了带有这种外源DNA顺序的TGM。1982年Palmiter等运用此法得到的所谓“超级巨鼠”,曾引起整个生物学界的轰动。第9页，共44页，星期日，2025年，2月5日到目前为止，人类已获得转基因鱼、鼠、羊、猪、兔、牛等大小动物。从转基因动物所获得的资料几乎涉及医学遗传学、肿瘤学、免疫学等的基因研究，还涉及生物药物的研究，基因治疗的开发研究等。第10页，共44页，星期日，2025年，2月5日2转基因动物的制备方法第11页，共44页，星期日，2025年，2月5日2.1显微注射法也称原核显微注射法，是发展最早、使用最为广泛的转基因方法之一。利用显微操作技术将外源基因直接注射到试验动物的受精卵中，注射的外源基因与胚胎基因组融合，再通过胚胎移植技术将整合有外源基因的受精卵移植到受体子宫内发育，这样分娩的动物体内的每一个细胞都含有外源DNA片段。第12页，共44页，星期日，2025年，2月5日第13页，共44页，星期日，2025年，2月5日第14页，共44页，星期日，2025年，2月5日以使用较多的小鼠为例，这一方法的实验程序如下：

⑴准备假孕母鼠（养母）⑵受精卵的准备⑶基因导入⑷胚胎移植⑸对幼鼠的鉴定第15页，共44页，星期日，2025年，2月5日第16页，共44页，星期日，2025年，2月5日优点：外源DNA大小基本不受限制(1-50kb)导入过程直观整合率高

第17页，共44页，星期日，2025年，2月5日缺点：设备昂贵、环节较多对操作人员有较高的技术要求

低效率（尤其是大家畜）

对卵子伤害大，胚胎存活率低基因整合随机性转基因沉默第18页，共44页，星期日，2025年，2月5日2.2精子载体介导法将精子反复冷冻或经过化学物质处理后与外源DNA共同孵育,从而使外源DNA与精子结合,然后通过人工授精得到转基因个体目前国际上极少成功模型，国内也很少有相关报道，精子载体法很少被应用。第19页，共44页，星期日，2025年，2月5日体外受精法胞质内显微注射法体外受精法是一种直接用精子作为外源DNA载体的转基因方法,其过程是将成熟的精子与外源DNA进行预培养,因为在一定条件下,精子核后帽区有自发结合DNA的能力,因此,精子能够携带外源DNA进入受精卵,并使之受精,从而使外源DNA整合到受体染色体中而得到转基因动物。第20页，