5. 人类融合基因P210 RNA扩增检测试剂盒 阳性判断值研究资料（ROC曲线法）.docxVIP

ROC曲线法确定体外诊断试剂临界值阳性判断值

人类融合基因P210RNA扩增检测试剂盒

（数字PCR法）

本文采用ROC法确定体外诊断试剂临界值/阳性判断值，数据为模拟供参考，具体过程如下：

1样本

1.1样本来源

****人民医院。

1.2样本类型

全血标本(EDTA抗凝)。

1.3样本要求

使用新鲜的全血（EDTA-Na2、EDTA-K2、EDTA-K3抗凝）。样本2-8℃可保存24小时，如样本不能及时测定，应置于-20℃以下冰箱保存，可稳定2年。

1.4参考个体（对照组）的选择

除下表明确排除的人群外，均可入选。

1.5病例组的选择

已诊断患有白血病患且Bio-Rad的数字PCR法试剂盒（QXDxBCR-ABL%ISKit）检测为阳性的患者

2参考区间确定的方法

一般来说，如不做特殊考虑，一般以约登指数最大，即使（灵敏度＋特异度－1）达到最大所对应的值为最佳诊断界值。

样本量计算：根据文献《诊断试验ROC评价的样本含量估计方法》中单个诊断试验稳健法公式计算。

当基本分布为连续分布时，用X、Y分别表示非患病组合患病组的诊断测量结果，此时ROC曲线下面积为θ=P（XY），对此单一试验评价时，患者或非患者所需最小样本量min(m,n)为：

上式中m,n分别为患者与非患者数量，α为I类错误概率，Z为相应标准正态分位数，θ为待评试验的ROC曲线下面积。实际应用时，用预期估计值

代替，L为θ的可信区间宽度，即θ的可信区间上下限之差。

此方法之所以称为稳健估计，是因为：①公式中θ的实际方差用其最大方差θ(1-θ)/min(m,n)代替，从而获得θ的稳健可信区间，由此逆推而来；②只要AUC实际值大于或等于预计值，此样本量即可保证非参θ可信区间估计宽度不高于L值。

用此方法做样本量估计时所需已知条件为：①I类错误概率；②待评试验预期曲线下面积口值；③预期口的可信区间宽度L。

此方法的计算依赖于AUC估计值渐近正态，以牺牲把握度来达到稳健。当AUC接近1时，此法估计的近似值不如AUC接近0.5时效能好。再者，此法估计的样本量比双正态法估计的样本量大，两者最小的比例接近1.3。

取θ=0.85，α=0.05，L=0.05，计算得样本量min(m,n)=39。

即对照组和正常值样本量应不低于39例。

3参考区间确定试验步骤：

①样本RNA抽提

采用Trizol试剂盒提取样本RNA，具体的操作步骤见说明书。

②反转录cDNA

③数字PCR反应

质量控制：当测试出现异常值时，建议进行校准和质控测试。

质控：用质控品进行测试，测试结果应在靶值范围内。

4试验数据及结果汇总(单位：%IS)

7.ROC曲线法临界值的确定

根据文献《ROC曲线下面积的计算方法》，采用ROC曲线下面积估计的非参数法：

ROC曲线下面积

该公式为患者组的??个??与非患者组的个??相比较，如果前者大于后者，则比较结果为1，相等时为0.5，小于时为0，将×个比较结果相加取平均值即得到面积的估计值A。如果观察值越小为患者的可能性越大，则改变公式中的大于号为小于号、小于号则改大于号即可。曲线下面积方差计算公式为：

另：根据文献《非参数法估计ROC曲线下面积》：

面积A的置信区间为：??，??标准正态分位数。

计算过程如下：

经计算：A=T/(??)

=2784/(53*55)

=0.95506

95%置信区间为（0.906~1.000）

临界值计算及ROC曲线绘制：

逐渐增大临界值，分别计算敏感度，1-特异性，约登指数，列成下表：

一般来说，如不做特殊考虑，一般以约登指数最大，即使（灵敏度＋特异度－1）达到最大所对应的值为最佳诊断界值。根据统计结果，本案例临界值为0.05766。

根据上述数据，在Excel中绘制ROC曲线如下：

8.结论：

由测定结果经统计分析得人BCR/ABL融合基因P210RNA扩增检测试剂盒

（数字PCR法）临界值为：0.002%。

9.其他

如何利用Excel进行ROC相关运算，可参考：用Excel绘制ROC曲线(受试者工作特征曲线)计算临界值参考值、AUC-ROC曲线下面积