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Ø原位检测
显示荧光
Ø抗原抗体特异反应激发光
Ø间接法
抗体荧光素标记
的抗抗体
抗原
Vinculin
Hela细胞
间接荧光抗体染色法示意图
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实验用品
试剂：材料：
固定液：4%PFAHela细胞
细胞培养皿
细胞通透：0.2%TritonX
封闭试剂：10%正常山羊血清
一抗：小鼠源抗Vinculin单克隆抗体仪器：
荧光显微镜
二抗:AlexaFluor555标记的山羊抗小鼠IgG
DAPI（4’,6-二脒基-2-苯基吲哚）
PBS洗涤缓冲液：PH7.4
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将细胞铺在将细胞培养加入4%PFA染色
24孔板中至所需密度固定10min或保存
PBS洗PBS洗
涤涤
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加入一抗加入二抗加入DAPI复染
PBSPBSPBS
洗涤洗涤洗涤
0.2%
封闭4℃过夜37℃1-2小时37℃5-10min荧光显微镜
TritonX观察
处理5min室温30min
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三，观
察
human
HeLa
cells
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Ø细胞不要铺的过密:60-70%
Ø防止细胞污染
Ø固定时间不要太长,一般10-30min
Ø
TrionX处理时间不宜过长，膜蛋白可不必处理
Ø选择合适的封闭液
Ø二抗孵育后,一定要洗干净
必要时用恒温摇床摇洗
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免疫细胞化学技术
1.免疫荧光技术
标记物
2.免疫酶技术
使抗体或抗原
抗
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