DB22T 2908-2018 长白山林蛙油的测定 高效液相色谱法.docxVIP

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DB22

吉林省地方标准DB22/T2908—2018

长白山林蛙油的测定高效液相色谱法

DeterminationofchangbaimountainranaeoviductusHPLCmethod

2018-11-12发布2018-12-30实施

吉林省市场监督管理厅发布

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DB22/T2908—2018

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。本标准由吉林省林业厅提出并归口。

本标准起草单位：吉林大学。

本标准起草人:王永生、徐阳、王诗涵、鲍慧玮、赵中原、崔庆艳、肖瑶、刘敏、王艳伟、房永清、王道君、王仁祥、伊常青。

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DB22/T2908—2018

长白山林蛙油的测定高效液相色谱法

1范围

本标准规定了用高效液相色谱法对长白山林蛙油（ChangbaimountainRanaeOviductus）进行定性测定。

本标准适用于长白山林蛙油的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T19507地理标志产品吉林长白山中国林蛙油

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

长白山林蛙油changbaimountainranaeoviductus

长白山林蛙油是主产于长白山的林蛙油，即《中华人民共和国药典》2015版一部收载的哈蟆油，为蛙科动物中国林蛙RanatemporariachensinensisDavid雌蛙的输卵管，经采制干燥而得。

4原理

通过长白山林蛙油高效液相色谱中的特征峰鉴别长白山林蛙油。

5试剂或材料

除特别说明外，所有试剂均为分析纯。5.1无水乙醇（C2H5OH）。

5.2二氯甲烷（CH2Cl2）。5.3甲醇（CH3OH）。

5.4胆固醇对照品（供鉴别用）（C27H46O)。5.5色谱乙腈（C2H3N）。

6仪器设备

6.1天平（感量0.00001g）。6.2粉碎机（50HZ~60HZ）。

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DB22/T2908—2018

6.340目筛。

6.4圆底烧瓶（100mL）。6.5量筒（50mL）。

6.6水浴锅。

6.7普通漏斗（100mL）。6.8滤纸。

6.9圆底烧瓶（250mL）。6.10旋转蒸发仪。

6.11循环水式真空泵。

6.12容量瓶（2mL）。

6.13微孔滤膜（0.45μm）。

6.14容量瓶（100mL）。

6.15高效液相色谱仪。

6.16十八烷基键合硅胶色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）。

7样品

符合GB/T19507要求的长白山林蛙油。

8试验步骤

8.1试样制备

取干燥长白山林蛙油适量（6.1），粉碎（6.2），过40目筛（6.3），置于室温下保存备用。

8.2供试品溶液制备

8.2.1精密称定上述粉末约3g（6.1），置于100mL圆底烧瓶（6.4）中，加入无水乙醇（5.1）40mL（6.5），80℃水浴回流提取15min（6.6），放冷，过滤（6.7，6.8），滤渣再同法提取2次，合并滤液（6.9），减压回收乙醇（6.10，6.11），得提取物。

8.2.2取上述提取物（8.2.1），加入适量二氯甲烷（5.2）溶解，并转移至2mL的容量瓶（6.12）中，挥干，加甲醇（5.3）定容至刻度，摇匀。用0.45μm微孔滤膜（6.13）滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

8.3对照品溶液制备

精密称取胆固醇对照品（5.4）约10mg（6.1），置于10mL容量瓶中（6.14），加甲醇溶解并定容至刻度，配制成浓度为1mg/mL的对照品溶液。

8.4试验条件

高效液相色谱仪（6.15），十八烷基键合硅胶色谱柱（6.16）；流动相：乙腈（A）-水（B）梯度洗脱（5.5，5.6），洗脱条件见表1；检测波长：215nm；柱温：30℃;进样量：5μL。

表1流动相洗脱条件

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时间

流动相A

流动相B

流速

min

%

%

mL/min

0～20

0

100

1

20～27

0→12

100→88

2

27～29

7