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液相色谱基础知识装填状态手动进样器的原理图进样状态交叉污染的原因微量注射器红色表示残留样品手动进样法一般的方法在进样状态下清洗针口在装填状态下插入微量注射器注入样品切到进样状态手动进样法便捷的方法（不需清洗）进样状态下插入微量注射器切到装填状态注入样品切回到进样状态柱温箱分析结果重现性好提高柱效降低柱压保证检测稳定性液相色谱基础知识液相色谱基础知识返回ODS柱的使用注意点：柱压低于150kgf/cm2柱温在40℃左右，最高使用温度为50℃缓冲液PH使用范围为2～7流动相有机溶剂比例过低,柱效下降快硅胶在PH为3～4时稳定性最好碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。HPLCBusinessDeptShimadzuCorporationHPLCBusinessDeptShimadzuCorporationHPLCBusinessDeptShimadzuCorporation输液泵-提高了柱入口压力柱子：使用了全多孔的微粒固定相，装填在小口径、短不锈钢的柱内。使溶质在固定相的传质，扩散速度大大加快，从而在短分析时间内获得高柱效和高分离能力注射器柱头进样发展到手动进样器、自动进样器，提高精度，简化操作提高分析质量、简化操作纯度：HPLC级=优级纯＞分析纯都经过蒸馏和0.45u的过滤（除纤维毛，未溶解的机械颗粒）有防腐剂、抗氧化剂经过0.2u过滤无紫外吸收（2）作糖的、酸的阴阳离子交换柱不能用有机溶剂冲（3）选用的溶剂应对样品有足够的溶解能力，可提高测定的灵敏度（4）使用低粘度的溶剂，可减少溶质的传质阻力，有利于提高柱效。

（5）如使用紫外检测器，不能选用有紫外吸收的溶剂，如使用示差检测器，就不能使用梯度洗脱（因随溶剂组成的改变，流动相的折光指数也在改变，无法使基线稳定）水要经过两次蒸馏处理的（有机质要出去），象二次离子交换水、电渗析水都未除有机质，注射水（针剂水）设备脏，时间长堵柱，最好自己做水，不要用生产设备上的水指数梯度又有凸型和凹形的区别。若流动相中含有两种或两种以上不同极性的溶剂，在洗脱过程中连续或间断改变流动相的组成，以调节它的极性，使每个流出的组份都有合适的容量因子。当样品中的第一个组分的容量因子比最后一个峰的容量因子相差几十倍甚至数百倍时，使用梯度洗脱的效果最好k岛津液相色谱维护保养01液相色谱基础知识SHIMADZU液相色谱基础知识液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用气相色谱：以气体作为流动相的色谱分离方法适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析流动相只起运载样品分子的能力液相色谱基础知识一、定义色谱法：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术移动相：携带样品流过整个系统的流体固定相：静止不动的一相，色谱柱固定液液相色谱基础知识液相色谱流程图01溶剂02输液泵03进样器04柱温箱05检测器06数据处理07液相色谱基础知识流动相的选择采用“HPLC”级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小与检测器相匹配溶剂等级水的等级纯化水蒸馏水去离子水波长(nm)纯化水去离子水因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物吸光率水/MeOH梯度ODS柱鬼峰GradientCurve1ml/min,0-100%MeOHover10minsandholdfor15mins.溶剂等级鬼峰的出现溶剂等级溶剂的等级HPLC级优级纯分析纯都经过蒸馏和0.45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过0.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质微量分析、梯度洗脱甲醇乙睛正己烷分析纯级和HPLC级溶剂的吸光度比较图溶剂等级GeneralMaintenanceandTroubleshooting溶剂等级缓冲液的使用使用前必须过滤使用后一定要进行清洗，以免造成腐蚀、磨损、阻塞:用纯水冲洗30-60min（1ml/min），再用