抗氧化物活性测定方法总结.pdfVIP

天行健，君子以自强不息。地势坤，君子以厚德载物。——《周易》

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抗氧化物活性测定方法（倾向于考虑DPPH法和ORAC法）

1.FRAP法:铁离子还原抗氧化能力测定法[1]

FRAP(ferricionreducingantioxidantpower)方法，在低pH值的溶液中，

3+3+2+

Fe-TPTz(Fe-三吡啶三嗪)被抗氧化剂还原成有色的Fe-TPTZ。反应的结果常

2+

以Fe当量或标准物质的抗氧化能力表示。

该法快速简便、易于操作、重复性好，但FRAP反应属于电子转移(SET)反应，

因此FRAP方法不能够测定氢转移反应(HAT)起作用的物质。而且该法实际测定

3+2+

的是待测生物活性物质将Fe还原为Fe的能力，因此没有抗氧化能力的生物学

相关性。

2.TEAC法(troloxequivalentantioxidantcapacity)

ABTS(2,2-amino-di(2-ethyl-benzothiazolinesulphonicacid-6)ammonium

salt,2,2氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉磺酸-6)铵盐)与过氧化物酶和氢过氧化物在一

起形成ABTS+阳离子自由基。在抗氧化剂存在时，这种自由基混合物的光吸收

值下降，下降程度取决于抗氧化剂的抗氧化能力，测得的结果以TEAC表示，

即被测抗氧化剂清除ABTS·+的能力(吸光度大小的变化)与标准抗氧化剂

trolox(VE的水溶性类似物)清除ABTS·+的能力的比值。

TEAC法十分简单，适用于大量样品的分析检测。但是，ABTS·+并非生理

自由基，缺乏生理相关性，而且与FRAP方法相似，ABTS·+与不同抗氧化剂

问的氧化反应时间不同，因此，只能定性不能定量评价样品的抗氧化能力。

[23]

3.DPPH法，(2，2-diphenyt-l-picrylhydrazylradicalscavengingcapacity)

DPPH·(二苯代苦味肼基自由基)法是较常用的方法之一。DPPH·是一种稳

定的以氮为中心的自由基，其醇溶液呈深紫色,在517nm处有一吸收峰。当反应

系统中存在自由基清除剂时，它可以和DPPH·的单电子配对而使517nm处的

吸收峰渐渐消退。而且，这种颜色变浅的程度与配对电子数成化学计量关系。因

此，根据吸光度的变化可测得抗氧化剂的活性。通过计算DPPH自由基剩余一半

时所需抗氧化剂的浓度(EC)以及时间(TEC)反应抗氧化物的活性。

5050

DPPH法快速、简单，仅需要一台紫外分光光度计就可以测定，但DPPH方

法存在的不足是，当被测物与DPPH紫外吸收有重叠时，将会影响测定结果，比

如类胡萝卜素。此外，由于空间位阻决定反应的倾向，小分子化合物由于更易接

近自由基而拥有相对较高的抗氧化能力。此外该方法线性范围也相对较窄，而且

所有还原剂都能够对DPPH起作用，因此结果并不能完全代表抗氧化能力。

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4.ORAC法:氧化自由基吸收能力测定