纸层析法分离氨基酸.pptVIP

取纸条，在距离下端2.5cm处，用铅笔画一水平线，在线上间距离2cm画出四个点（可标记为1，2，3，4），作为原点。用毛细管在前1，2，3号分别点上三种氨基酸标准溶液，4号点氨基酸混合试液，点出的扩散原点直径约2mm大小。纸层析法分离氨基酸指导教师：程靖通过对氨基酸的分离，学习运用纸色谱法分离混合物的基本原理，掌握纸色谱的操作方法；01学习如何根据不同组分的分离结果来鉴别未知试样的组分。02实验目的：实验原理纸色谱分离法又称纸层析法，是根据不同物质在两相中的分配比不同而进行分离的一种微量分离方法。纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。当有机相流经固定相时，物质在两相间不断分配而得到分离。溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示：Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离实验原理：实验原理：原点展开后斑点溶剂前沿a1a2bAB实验目的实验原理仪器试剂实验步骤注意事项思考题01Rf：0~1，Rf值相差越大，分离效果越好。02本实验分离和鉴定的氨基酸混合液：异亮氨酸、赖氨酸和谷氨酸。03无色物质的纸色谱可用光谱法（紫外光照射）或显色法鉴定，氨基酸纸色谱图谱常用茚三酮或吲哚醌作为显色剂，本实验采用茚三酮作为显色剂。0102显色机理：玻璃层析筒120mm×250mm(φ×h)。01层析纸条100mm×220mm。02毛细管直径1mm左右。03喷雾器。04直尺，铅笔，电吹风，一次性手套。05主要仪器：仪器试剂：展开剂正丁醇:甲酸:水＝60:12:8。茚三酮1g·L-1乙醇溶液。0103氨基酸标准溶液2g·L-1水溶液。02氨基酸混合试液将（2）配制的三种氨基酸等量混合。04主要试剂：在层析缸中装入展开剂，其高度约1.5~2.0cm；准备滤纸：戴上手套，取层析滤纸一张，在纸的另一端距边缘3.0cm处用铅笔画一直线，在此直线上每隔2cm作一记号，为点样位置（即原点）；点样：用毛细血管依次将异亮氨酸，谷氨酸，赖氨酸和混合样品分别滴在四个位置，点样干后再点一次；注意事项：每个点在纸上扩散的直径，最大不超过3mm；实验操作：实验步骤

——点样3.0cm3.0cm1234异亮氨酸赖氨酸谷氨酸混合液各点φ≈2mm实验目的实验原理仪器试剂实验步骤注意事项思考题取纸条，在距离下端2.5cm处，用铅笔画一水平线，在线上间距离2cm画出四个点（可标记为1，2，3，4），作为原点。用毛细管在前1，2，3号分别点上三种氨基酸标准溶液，4号点氨基酸混合试液，点出的扩散原点直径约2mm大小。*