DB22T 2946-2018 野生大豆抗胞囊线虫鉴定技术规范　.docxVIP

ICS65.020B05

备案号：61359-2019DB22吉林省地方标准

DB22/T2946—2018

野生大豆抗胞囊线虫鉴定技术规范

Technicalspecificationsforbioassayofwildsoybeanresistancetosoybeancyst

nematode(Heteroderaglycines)

2018-12-13发布2018-12-30实施

吉林省市场监督管理厅发布

I

DB22/T2946—2018

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由吉林省农业农村厅提出并归口。

本标准起草单位：吉林省农业科学院。

本标准主要起草人：袁翠平、董英山、王玉民、赵洪锟、刘晓冬、齐广勋、王英男、李玉秋、颜秀娟。

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DB22/T2946—2018

野生大豆抗胞囊线虫鉴定技术规范

1范围

本标准规定了野生大豆对大豆胞囊线虫抗性的鉴定方法和抗性评价。本标准适用于野生大豆种质资源对大豆胞囊线虫的抗性鉴定与评价。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。2.1

胞囊cyst

大豆胞囊线虫雌虫，每个胞囊内约含200粒～600粒卵，从胞囊中孵化出来即为二龄幼虫。2.2

胞囊指数（雌虫指数）femaleIndex（FI）

接种后28d~30d，供试植株根系上的胞囊数占感病对照植株根系上胞囊数的百分比。2.3

大豆胞囊线虫类群HGtypeHeteroderaglycinestype(HGtype)

在形态上没有差异，但在寄主上具有显著致病性差异的大豆胞囊线虫群体，需采用特定的一套鉴别寄主进行鉴别。目前主要采用Niblack等学者提出的HGtype鉴别寄主。

3鉴定方法

3.1接种物的准备

3.1.1大豆胞囊线虫的繁殖

3.1.1.1宜使用本地区优势HGtype或混合大豆胞囊线虫群体。

3.1.1.2将含有大于30个/100g胞囊的病土装入高度16cm～25cm，盆口径15cm～25cm的塑料盆中，播种高感大豆品种，每盆3株～5株。

3.1.1.3出苗后30d～35d，将大豆根系轻轻拔出，用高压水枪冲洗根系，将根系上的胞囊收集于干净的塑料桶内。

3.1.2胞囊和二龄幼虫悬浮液的制备

3.1.2.1将含有胞囊的悬液倒入自上而下依次为20目,40目,60目的套筛上，将胞囊收集在60目

网筛上。

3.1.2.2将3.1.2.1收集到的胞囊用橡胶棒碾碎，使之释放出卵和少数的二龄幼虫。用洗瓶冲洗卵和二龄幼虫，将其冲入自上而下依次为200目，500目的套筛上，将卵和二龄幼虫收集在500目网筛上。3.1.2.3用洗瓶将500目网筛上的卵和幼虫转移到烧杯中，加水配制成卵和幼虫悬浮液。

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3.1.2.4摇匀并用100μL的移液器吸取一定量的卵和幼虫悬浮液置于载玻片上，通过40倍显微镜观察计数卵和幼虫，配制成2000个/mL卵和幼虫的悬浮液，备接种用。

3.2接种植物的准备

3.2.1种子消毒

将健康饱满待鉴定的野生大豆、感病对照种子，用1%次氯酸钠溶液浸泡3min，期间搅动2次~

3次，然后用灭菌的蒸馏水冲洗3次～4次。

3.2.2种子萌发

3.2.2.1消毒后的野生大豆种子在萌发前用无菌刀片在远胚芽处划破种皮。

3.2.2.2将灭菌的滤纸放置在灭菌的培养皿内，然后将种子放置在湿润的滤纸上，于光照培养箱中25℃发芽3d，期间保持滤纸湿润。

3.2.3幼苗移栽

3.2.3.1抗胞囊线虫鉴定试验在温度保持在27℃±2℃温室内进行。

3.2.3.2试验完全随机或随机区组设计，设3次重复，每个重复5株。

3.2.3.3在直径27cm，高30cm的塑料桶中放入5cm厚的灭菌细砂，然后将直径4cm，长25cm两端通透的PVC管插入细砂中，每个桶约插入20个PVC管，PVC管内和管间填好细砂，且高度一致，细砂距离上管口2cm。

3.2.3.4将萌发3d健壮的幼苗移栽于PVC管中，每管移栽1株，