环境因素对荧光光谱和荧光强度的影响.docVIP

3．环境因素对荧光光谱和荧光强度的影响

（1）溶剂的影响。一般地讲，许多共轭芳香族化合物的荧光强度随溶剂极性的增加而增强，且发射峰向长波方向移动。如图3-4所示，8-羟基喹啉在\o四氯化碳四氯化碳、\o氯仿氯仿、\o丙酮丙酮和\o乙腈乙腈四种不同极性溶剂中的荧光光谱。这是由于n→π＊跃迁的能量在极性溶剂中增大，而π→π＊跃迁的能量降低，从而导致荧光增强，荧光峰红移。在含有重原子的溶剂如碘乙烷和四氯化碳中，与将这些成分引入荧光物质中所产生的效应相似，导致荧光减弱，磷光增强。

（2）温度的影响。温度对于溶液的荧光强度有着显著的影响。通常，随着温度的降低，荧光物质溶液的荧光量子产率和荧光强度将增大。如荧光索钠的乙醇溶液，在0℃以下温度每降低10℃，荧光量子产率约增加3%，冷却至

（3）pH的影响。假如荧光物质是一种\o弱酸弱酸或弱碱，溶液的pH值改变将对荧光强度产生很大的影响。大多数含有酸性或碱性基团的芳香族化合物的荧光光谱，对于溶剂的pH和氢键能力是非常敏感的。表3-1中苯酚和苯胺的数据也说明了这种效应。其主要原因是体系的pH值变化影响了荧光基团的电荷状态。当pH改变时，配位比也可能改变，从而影响金属离子-有机配位体荧光配合物的荧光发射。因此，在荧光分析中要注意控制溶液的pH。

（4）荧光的熄灭。它是指荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子的相互作用引起荧光强度降低的现象。这些引起荧光强度降低的物质称为\o熄灭剂熄灭剂。

五．影响荧光测量的几种因素：

1．温度影响：一般说来，荧光随温度升高而强度减弱，温度升高1℃

溶液荧光光谱通常有以下几个特征：

1）Stokes位移。在溶液荧光光谱中，所\o观察观察到的荧光的波长总是大于激发光的波长，即λem＞λex。这主要是由于发射荧光之前的振动驰豫和内转换过程损失了一定的能量，这是产生Stokes位移的主要原因。

2）荧光发射光谱的形状与激发波长无关。由于荧光发射发生于第一电子激发态的最低振动能级，而与荧光体被激发至哪一个电子态无关，所以荧光光谱的形状通常与激发波长无关。

3）与激发光谱大致成镜像对称关系。一般情况下，基态和第一电子激发单重态中振动能级的分布情况是相似的，所以荧光光谱同激发光谱的第一谱带大致成镜像对称。

化学发光具有以下几个特点：

1.极高的灵敏度，\o荧光虫素荧光虫素（LH2）（luciferin）、\o荧光素酶荧光素酶（luciferase）和\o磷酸三腺苷磷酸三腺苷（ATP）的化学反应可测定2×10-17mol/L的ATP，可检测出一个细菌中的的ATP含量。

2.由于可以利用的化学发光反应较少，而且化学发光的光谱是由受激分子或原子决定的，一般来说也是由化学反应决定的。很少有不同的化学反应产生出同一种发光物质的情况，因此化学发光分析具有较好的选择性。

3．仪器装置比较简单，不需要复杂的分光和光强度测量装置，一般只需要干涉滤光片和光电倍增管即可进行光强度的测量。

4.分析速度快，一次分析在1min之内就可完成，适宜自动连续测定。

5.定量线性范围宽，化学发光反应的发光强度和反应物的浓度在几个数量级的范围内成良好的线性关系。

分子发光分析法-基本原理

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化学发光是基于化学反应所提供足够的能量，使其中一种产物的分子的\o电子被电子被激发成激发态分子，当其返回基态时发射一定波长的光，称为化学发光，表示如下

它表示物质发射荧光的能力，Φ越大，发射的荧光越强。由前面已经提到的荧光产生的过程中可以明显地看出，物质分子的荧光产率必然由激发态分子之活化过程的各个相对速率决定。若用数学式来表达这些关系，得到式中：kf为荧光发射的速率常数，∑ki为其他无辐射跃迁速率常数的总和。显然，凡是能使kf升高而其他ki值降低的因素都可使荧光增强；反之，荧光就减弱。kf的大小主要取决于\o化学结构化学结构；其他ki值则强烈地受环境的影响，也轻微地受化学结构的影响。

2．荧光与分子结构的关系

（1）跃迁类型。实验证明，π→π＊跃迁是产生荧光的主要跃迁类型，所以绝大多数能产生荧光的物质都含有芳香环或杂环。

（2）共轭效应。增加体系的共轭度，荧光效率一般也将增大，并使荧光波长向长波方向移动。共轭效应使荧光增强的原因，主要是由于增大荧光物质的摩尔吸光系数，π电子更容易被激发，产生更多的激发态分子，使荧光增强。

（3）刚性平面结构。荧光效率高的物质，其分子多是平面构型，且具有一定的刚性。例如荧光素和酚酞结构十分相似，荧光素呈平面构型，是强荧光物质，而\o酚酞酚酞没有氧桥，其分于不易保持平面，不是荧光物质。又如芴和联苯，芴在强碱溶液