生工微生物遗传转座因子.ppt

7.2.7Mu噬菌体的转座转座噬菌体是具有转座功能的一类可引起突变的溶源性噬菌体，无论是溶源状态还是裂解状态，总是整合到寄主染色体上。研究较多的是Mu噬菌体，同一般噬菌体不同，它可以整合到染色体的任一位点上。特点不是细菌基因组的成分，易于识别可诱导产生，易于制备第23页，共33页，星期日，2025年，2月5日7.3细菌转座子的遗传效应和应用遗传效应插入突变（抗药性、营养缺陷型）基因重排（缺失、扩增和倒位）极性效应：不仅能破坏被插入的基因，还可大大降低位于远离启动子一端的基因的表达应用随机诱变：通过质粒载体转座子基因打靶技术标签技术第24页，共33页，星期日，2025年，2月5日关于生工微生物遗传转座因子第1页，共33页，星期日，2025年，2月5日主要内容6.1转座子概述6.2细菌转座子的类型和结构6.3细菌转座子的遗传效应和应用第2页，共33页，星期日，2025年，2月5日6.1转座子概述6.1.1概念转座因子（transposableelement,TE）是细胞中能改变自身座位的一段DNA序列，它可以从复制子的一个座位跳跃到另一个座位，已从同一个细胞的一个复制子跳跃到另一个复制子，DNA片断的这种运动称为转座。这段会跳跃的DNA片断称为转座子。第一个转座因子是美国遗传学家McClintock于20世纪50年代通过对玉米的遗传研究中发现的，现在认为转座子存在于地球上所有的生物。转座子学说使McClintock荣获1983年诺贝尔生理医学奖。第3页，共33页，星期日，2025年，2月5日是基因组内相对独立的、可移动序列。它们不必借用噬菌体或质粒的形式就可以从基因组的一个部位直接转移到另一个部位。转座子每次移动时携带着转座必需的基因一起在基因组内跃迁，所以转座子又称跳跃基因（jumpinggene）。转座子是基因组的正常组成成分，不以独立的形式存在（如噬菌体或质粒DNA）。转座的发生不依赖于转座子和靶位点之间任何的序列同源性。转座以很低的频率发生（睡美人），而且转座子的插入是随机的.6.1.2转座子的特点第4页，共33页，星期日，2025年，2月5日6.1.3转座子的分类两个基本类型：DNA转座子：一种是以编码蛋白质的DNA序列的形式存在，其编码的蛋白能直接操作DNA，从而使转座子能够在基因组内繁殖其自身。RNA作为中介：与反转录病毒有关，并且它们可移动的特性来自于它们能由RNA转录物产生DNA拷贝，这种DNA拷贝然后被整合到基因组的新位点。第5页，共33页，星期日，2025年，2月5日6.2细菌转座子细菌中可转座的遗传因子可分为四类插入序列转座子接合型转座子某些温和性噬菌体第6页，共33页，星期日，2025年，2月5日6.2.1插入序列最简单的转座子，被称为插入序列IS（insertionsequences,IS）。IS元件是细菌染色体和质粒的正常组成部分，表示法一般按照发现的顺序或发现人的意愿，用阿拉伯数字表示，如IS1,IS2等。IS元件是独立的结构单位，每个元件只编码为自身转座所需要的蛋白质。第7页，共33页，星期日，2025年，2月5日IS元件具有一个典型的结构，它的末端为反向重复序列，而与其相连的宿主DNA的末端为短的正向重复序列。IS结构第8页，共33页，星期日，2025年，2月5日在插入部位，ISDNA总是和很短的正向重复序列（directrepeats）相连。但在插入之前靶部位只有这两个重复序列中的一个。转座后在转座子的两侧各存在一个此序列的拷贝。转座的结果是靶部位序列形成了两个正向重复序列。第9页，共33页，星期日，2025年，2月5日当在一段DNA序列中见到这种结构类型时，可被用来鉴别转座子。反向重复序列标明了转座子的末端。所有类型转座子的转座皆需转座酶（transposase）对末端的识别。所有的IS元件皆含有一个单一的长编码区，其起始于一端的反向重复序列之内，而刚好终止于另一端的反向重复序列之前或之内，它编码转座酶。第10页，共33页，星期日，2025年，2月5日6.2.2细菌转座子(Tn)将带有抗性基因并能在不同DNA分子间移动的遗传单位叫做细菌转座子（bacterialtransposon,Tn）一般带有抗性基因，容易被鉴定，所以研究得较为深入Tn还带有其它基因，如乳糖发酵基因、胞外肠毒素基因等第11页，共33页，星期日，2025年，2月5日6.2.3细菌转座子的分类复合转座子有两个完全相同或类似的插入序列（IS）和某种抗药性基因组成的复合因子两个IS在Tn中做反向或正向排列，IS可单独转座，也可带动整个T