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40色全光谱流式用于人外周血中主要细胞亚群的深度免疫表型

文章背景

ReferenceOMIP-069Forty-ColorFullSpectrumFlowCytometryPanelforDeepImmunophenotypingof

MajorCellSubsetsinHumanPeripheralBlood

OMIP是国际流式学会旗下CytometryPARTA杂志中的专栏，全称为：OptimizedMulticolor

ImmunofluorescencePanels。目的是为多色方案的科研人员提供素材，减少其方案的开发时间，提高实验效率。

一、实验背景

为了理解免疫逃避的机制和途径，无论是在免疫治疗后还是在对癌症、自身免疫和传染病的自然免疫反应中，都需

要能够更深入地了解免疫系统的方法和方案。免疫亚群的更大特征可以在确定可靶向生物标志物和开发新的治疗方法方

面做出更明智的决定。

解开人类免疫反应的复杂性需要在单细胞和群体水平上进行高通量、深入分析的能力。流式细胞术试图通过结合荧

光标记的抗体来表征单细胞蛋白表达，从而满足这一需求到特定的感兴趣的标记。

OMIP中展示的小组检查了CD4和CD8T细胞，调节性T细胞(Tregs)，γδT细胞，nkt样细胞、B细胞、NK

细胞、单核细胞、嗜碱性细胞、先天淋巴样细胞(ILCs)和树突状细胞。额外的标记允许表征主要的B细胞和T细胞亚群-

幼稚，记忆和效应-以及假定的T辅助亚群。使用活性染料(Live/DeadFixableBlue)排除死细胞。

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二、种属与细胞类型

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三、配色与分群

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四、圈门策略

本文提出了一种用于识别主要细胞亚群的门控策略。

1.在排除双链细胞和死亡细胞后，嗜碱性粒细胞被描述为CD45+CD123+HLA-DR-。

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2.淋巴细胞和单核细胞基于FSCA/SSC-A特性进行门控。

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3.单核细胞通过CD14和CD16表达分为：

非经典细胞CD14−CD16+；

中间细胞CD14+CD16+/low；

经典细胞CD14+CD16-。

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4.从淋巴细胞门中，鉴定出以下群体：

CD3−TCRγδ−、CD3+TCRγδ+和CD3+TCRγδ−。

CD3+TCRγδ+群体基于CD45RA和CCR7的表达进行表征；

CD3+TCRγδ−群体分为CD3+CD56+（NKT-like）和CD3+CD56−亚群。

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