真菌感染实验诊断.pptVIP

第三章真菌感染实验诊断一、真菌的形态特性（一）单细胞真菌呈圆形，如酵母菌。（二）多细胞真菌由菌丝和孢子组成，称丝状菌或霉菌。

菌丝和孢子的形态因菌而异，是鉴定1真菌的重要依据。孢子又分为多种，2如叶状孢子、分生孢子和孢子囊孢子3等。4真菌培养要求不高，常用沙氏(Sabouraud)培养基(含1％蛋白胨、4％葡萄糖或麦芽糖、2％琼脂)培养，适宜温度22℃—28℃，但深部真菌为37℃。形成三种菌落，菌落形态是鉴别真菌的重要依据。二、真菌菌落特性酵母型菌落是单细胞真菌的菌表面光滑湿润柔软、边缘整齐，落，形态与细菌菌落相似，较大，如新生隐球菌。类酵母型菌落如白假丝酵母菌，形成假菌丝，伸人培养基中。霉菌型菌落是多细胞真菌的菌落。菌落呈棉絮状、绒毛状，并产生不同的色素，如皮肤癣菌。第二节标本采集及检验程序

一、临床标本的采集(一)临床标本类别1．皮肤的角质性物质：毛发、指(趾)甲、皮屑等。各种分泌物和排泄物：生殖道分泌物、耳垢、痰、粪便、尿液等。血液和体液：体液包括胸水、腹水、脑脊液、淋巴穿刺液等。脓汁及渗出物。0102采集的标本要适宜不同真菌感染应采取不同的临床标本。怀疑为浅部真菌感染如体癣，应刮取病变边缘的痂、皮屑，发癣应取病发。深部真菌感染应取血液、脑脊液、脓汁等。(二)采集标本注意事项在用药前采集标本一般真菌标本须在用药前采集，对已用药者则需停药一段时间后再采集标本。0102030405采集的标本量要足血液和脑脊液标本5ml，胸腔液20ml，皮屑标本两块，活体组织两份(一份送病理科检查，一份作镜检和培养)。严格无菌操作并进行消毒处理，尤其是采集血液和脑脊液标本，要避免污染杂菌。采集标本立即送检深部真菌标本最长不得超过2h。第三节真菌检验一、标本直接检查(一)显微镜检查直接镜检对真菌病的诊断较细菌更为重要。许多真菌标本不需染色即可直接镜检，如癣病标本多用KOH湿片检查法，即取病发或病损部位皮屑、甲屑置于载玻片上，加1滴10％-20％KOH液，然后加盖玻片并微微加热，使标本组织溶解透明，在显微镜下可观察到真菌的孢子和菌丝。有诊断意义，如浅部真菌病等；看到的就是真菌的形态，可确定某01母菌的厚膜孢子等；03些致病性真菌的属或种,如假丝酵02直接镜检的意义直接镜检阳性表示：判断某些真菌种的致病性等,如01皮肤癣菌、曲霉等。02直接镜检也有局限性：阴性结果不能排除真菌感染；有假阳性结果。因此，对直接镜检可疑结果应作复查或用其他检验方法鉴定。常用的方法有胶乳凝集试验、ELISA、半定量放射免疫法。均应设对照，防止发生假阳性和假阴性。(二)抗原检测01020304用胶乳凝集试验检测标本中的白假丝酵母菌甘露聚糖抗原。用胶乳凝集试验和ELISA检测血清和脑脊液中的隐球菌多糖荚膜抗05原，在治疗前检测非常敏感特异。用半定量放射免疫法检测血清、尿液和脑脊液中荚膜组织胞浆菌循环多糖抗原，可快速诊断。真菌的分离培养真菌培养是目前鉴定真菌的惟一方法。培养真菌的温度为28℃，但深部真菌为37℃。菌落是鉴别真菌的方法。注意以下几点：菌落性质：酵母菌还是霉菌；菌落大小，病原性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落大；菌落颜色病原性真菌颜色淡，01污染真菌颜色深；致病性真菌菌落下沉，有时使02培养基开裂；污染性真菌菌落03不下沉,很少引起开裂。041用于主要深部感染真菌如假丝酵3糖(醇)类发酵试验37℃孵育，2母菌、隐球菌等。4观察糖发酵情况。三、真菌的生化反应01同化碳源试验含菌生理盐水02与已融化的固体同化碳源培养03基(45℃)混合，然后在培养基04上分别加糖，置25℃孵育观察05结果。若24h后无变化可重复06加糖。如能同化周围有生长圈，07否则无生长。同化氮源试验同化碳源试1验相同，但需用无氮源的培2养基，不要加糖类，而加入3硝酸钾。4