细胞工程主要技术.pptVIP

克隆技术能快速培育出大量的优良品种家畜，而用传统的有性生殖方式培育动物良种不但需要花费很长的时间，而且优良性状难以在后代得到控制。克隆动物在畜牧业和医学方面的意义体现在：克隆动物的遗传背景完全一致，因而可以避免动物实验的背景干扰，如用在药物检测上，所得结果将更加稳定可靠。动物克隆技术可以用来保护濒危动物，用濒危动物的冷冻细胞随时可以克隆出新的成体动物，而无须耗费大量的人力物力。克隆动物可为需要组织器官移植的病人提供所需要的组织器官。国外已经开始了这方面的研究，例如科罗拉多大学的研究者用来源于克隆牛胎儿的多巴胺生成细胞，治疗帕金森氏病模型大鼠，已取得一定效果。治疗性克隆示意图转基因动物克隆技术*有性繁殖方式需要几代才能获得稳定表达外源基因的转基因动物，而通过转基因克隆动物的方式，很快便可获得新的转基因动物，从而提高转基因动物的生产效率。5、动物克隆技术如果与转基因动物技术结合起来将具有更大的发展潜力。中国农业大学的科学家正在利用转基因奶牛生产人类母乳，并希望三年内在超市中销售。2011年8月，荷兰研究人员对山羊进行转基因改造，让羊奶含有与蜘蛛丝一样的蛋白质。利用这种羊奶织成的织物强度是钢铁的10倍，制造防弹皮肤。治疗性克隆01动物模型02器官移植03濒危动物04转基因动物乳腺生物反应器05基础研究06遗传育种07克隆08讨论*克隆人什么时候出现？克隆人有没有必要？？？？童第周（1902-1979）童第周等(1965)将金鱼囊胚细胞核移植到鳑鮍的去核卵中,获得了少数核质杂种(nucleo-cytoplasmichybrid,NCH)幼鱼11990年,中国科学院发育生物学研究所杜淼获得了克隆兔。随后,中国科学家利用胚胎细胞相继克隆成了羊、猪、牛、小鼠等几种动物。21993年,美国的First用牛内细胞团细胞成功地获得了克隆牛。31997年,中国学者孟励在美国成功获得克隆猴。4至此,国内外动物克隆采用的均为胚胎细胞。1997年，用胚胎细胞获得的克隆猴1964年,Gurdon以爪蟾为材料,最早进行了体细胞核移植的尝试,获得了1.5％的蝌蚪。第二阶段同种体细胞克隆Dolly的产生1997年,英国罗斯林研究所I.Wilmut等宣布用成年羊乳腺细胞首次获得克隆羊“多莉”。使细胞核与去核卵细胞处于细胞周期的同步状态,以利于恢复核的全能性(重编程).实验成功的关键：血清饥饿法1998年，美国夏威夷大学的Yanagimachi等用克隆鼠的卵丘细胞核作供体，获得了克隆再克隆小鼠。1998年，新西兰成功地克隆了奶牛，并克隆了世界上仅存的最后一头珍稀牛。至此，同种体细胞克隆进入成熟阶段。克隆牛克隆猕猴克隆狗logo2002年初，我国首批成年体细胞克隆牛的群体诞生第三阶段异种体细胞克隆濒危物种数量日益减少，很难提供用于克隆的卵母细胞和代孕受体，促使科学家提出了异种克隆的设想：将一种动物的体细胞核移植到另一种动物的去核(遗传物质)卵母细胞中，来得以实现克隆的技术。但此阶段技术还处在实验探究阶段，尚未完全成熟。121998年1月，美国威斯康星大学的科学家们以牛的卵细胞为受体，成功克隆出猪、牛、羊、鼠和猕猴五种哺乳动物的胚胎。1998年～1999年，美国人White用珍稀动物盘羊的体细胞核与牛卵结合，我国学者陈大元将大熊猫体细胞核与兔卵结合，均成功克隆出早期胚胎。2000年，欧洲盘羊--奥姆布雷塔被成功克隆，科学家是为了营救目前世界上数目稀少的欧洲盘羊，避免它们从地球上灭绝消失。2003年5月，世界上第一只克隆骡子--格姆在美国诞生2005年8月24日，中国科学院动物研究所陈大元教授领导的团队，国际首例体细胞克隆亚洲黄羊在山东顺利降生（用山羊做受体）。克隆动物主要方法：第二节哺乳动物克隆的技术方法*胚胎细胞核移植02连续细胞核移植04胚胎分割01体细胞核移植03体细胞核移植法克隆动物的基本操作流程*优质动物体细胞的来源1动物卵母细胞的成熟培养2重构胚3胚胎移植4克隆动物检测5卵母细胞核6体细胞核7核移植8体外培养9126543动物体细胞的体外培养G0期(细胞周期时相)常规体外培养降低血清使用量细胞分裂停止移核前123456卵母细胞的成熟培养*卵丘—卵母细胞复合体(COC)用M199洗3次100μl成熟培养液成熟培养液：M199+10%FCS+10μg/mLPMSG+10μg/mLHCG5%CO2，38.5℃，饱和湿