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三、Northern印迹杂交技术二、Southern印迹杂交技术一、核酸分子杂交的基本原理本章概要分子杂交技术职业教育医学生物技术专业教学资源库四、Western印迹杂交技术五、生物芯片技术

基本原理核酸探针影响核酸分子杂交的因素0203核酸分子杂交基本原理目录01

1.核酸的变性与复性职业教育医学生物技术专业教学资源库（一）基本原理（1）变性当有酸、碱、热及某些变性剂（如尿素、乙醇、甲酰胺、胍等）等变性因素存在时，DNA分子双链间的氢键断裂，解离成两条无规则的卷曲状单链DNA，此现象称为变性（denaturation）。

1.核酸的变性与复性职业教育医学生物技术专业教学资源库（一）基本原理（2）复性变性DNA在适当条件下缓慢除去变性因素，可使两条彼此分开的链重新配对结合成双螺旋结构的过程。退火：热变性DNA在缓慢冷却时，可以复性，这种复性称为退火。杂交：将来源不同的两条单链核酸分子通过碱基互补形成杂化双链的过程。

职业教育医学生物技术专业教学资源库（一）基本原理2.核酸分子杂交原理探针对靶序列进行特异性的检测杂交的方式

案例：李然咳嗽、咳痰半月以上，痰中带血或咯血，前往市人民医院就诊，医生怀疑为肺结核，开具检验单对其痰液进行检测，判断是否感染结合分枝杆菌。请利用核酸分子杂交技术检测该痰液中是否有结核分枝杆菌感染。职业教育医学生物技术专业教学资源库（一）基本原理

职业教育医学生物技术专业教学资源库（二）核酸探针(probe)1.定义：指能与特定的靶序列（DNA或RNA）发生特异性互补结合，并带有可检测标记的已知序列的核酸片段。2.分类（1）根据标记物不同，核酸探针可分为放射性探针、非放射性探针（2）根据性质及来源不同，核酸探针可分为DNA探针、RNA探针、寡核苷酸探针

职业教育医学生物技术专业教学资源库（二）核酸探针(probe)3.标记物分类（1）放射性标记物：放射性同位素是目前应用最广的标记物，优点是灵敏度高，缺点是会造成放射性污染和身体伤害。目前核酸探针标记常用的同位素种类有：32P应用最多，放射性强，灵敏度高，缺点是半衰期短35S放射性较低，半衰期长，灵敏度较高，适用于核酸序列分析和原位杂交等实验。

职业教育医学生物技术专业教学资源库（二）核酸探针(probe)3.标记物分类（2）非放射性标记物非放射性标记常用生物素或地高辛（半抗原）、荧光素类、酶类等标记。优点是无放射性污染，较稳定，缺点灵敏性稍低。

职业教育医学生物技术专业教学资源库（二）核酸探针(probe)4.核酸探针的检测（1）放射性同位素探针的检测——放射自显影利用放射线在X线片上成影作用来检测杂交信号，称为放射自显影。

职业教育医学生物技术专业教学资源库（二）核酸探针(probe)4.核酸探针的检测（2）非放射性标记探针的检测直接检测法（用碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶直接标记探针）—杂交体通过显色反应直接观察结果。

职业教育医学生物技术专业教学资源库（二）核酸探针(probe)4.核酸探针的检测（2）非放射性标记探针的检测间接检测法（用生物素或地高辛标记探针）—杂交体与酶发生偶联反应后，通过显色反应再来观察结果。

1.探针的长度：负相关2.探针的浓度：正相关3.杂交体系离子强度：正相关4.杂交温度：低于Tm值20~25℃、高浓度盐溶液或有机溶剂可降低反应温度5.非特异性杂交反应：封闭膜上非特异性位点）职业教育医学生物技术专业教学资源库（三）影响核酸分子杂交的因素

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