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甘薯WRKY基因家族序列的分离与鉴定

摘要：根据WRKY基因家族序列的保守区域设计简并引物，从甘薯（Ipomoea

batatasL.）品种徐薯18中扩增出WRKY基因家族，经克隆、测序后得到15条

WRKY基因家族序列，其编码的氨基酸序列包含有WRKY基因家族所具有保守

的WRKYGQ和YEGKH（T/N/S/G/A/D）（H/Q）区。对甘薯WRKY基因家

族氨基酸序列与部分植物WRKY基因家族氨基酸序列进行聚类分析，发现其聚

为5类，相似性较高，推测各类中相似性较高的序列分别属于同一个基因家族。

关键词：甘薯（IpomoeabatatasL.）；WRKY基因家族；简并引物；分离；

鉴定

IsolationandIdentificationofWRKYGeneFamilyfromSweetPotato

bstract：Thedegenerateprimersdesignedfromtheconservedmotifsinthe

WRKYgenefamilywereusedtoamplifyWRKYgenefamilyfromIpomoeabatatas，

Xushu18.15WRKYgenefamilywereobtainedaccordingtocloningand

sequencing，andtheaminoacidsequencecontainedWRKYGQandYEGKH

（T/N/S/G/A/D）（H/Q）motifsoftheWRKY.Clusteranalysisofthepredictedamino

acidsequencesgroupedtheWRKYofIpomoeabatatasandtheknownWRKYin

NCBIdatabaseintofiveclasses，andthesequencesimilaritywashigh.Itwas

deducedthattheRGAswithhighsimilaritybelongedtoonegenefamily.

Keywords：sweetpotato（IpomoeabatatasL.）；WRKYgenefamily；

degenerateprimers；isolation；identification

甘薯（IpomoeabatatasL.）是世界上重要的粮食、饲料、工业原料及新型能

源用块根作物。中国是世界上最大的甘薯生产国，常年种植面积550万hm2，鲜

薯产量约1.2×108t，分别占世界甘薯种植总面积和总产量的60%和85%[1]。甘

薯在遗传上高度杂合，种内、种间杂交不亲和、遗传资源匮乏，遗传基础狭窄以

及病虫害、病毒病危害严重，严重制约了甘薯品种的遗传改良[2]。近年来，许

多研究表明通过基因工程手段能够改善甘薯的抗病和抗逆能力[3-6]。WRKY转

录因子是近年来在植物中发现的一类锌指型转录因子基因家族，其序列的N-端

含有高度保守的WRKYGQ氨基酸序列。WRKY转录因子能够与C/GACC/

序列（W-box）发生特异性结合，从而调节基因的表达[7]。WRKY转录因子广

泛参与植物对生物和非生物胁迫应答反应，包括对根结线虫、真菌、病毒、NaCl、

PEG、低温、高温、机械刺激以及低磷等逆境胁迫因子的响应[8-20]。另外，也

有研究表明WRKY基因家族参与激素的信号转导过程，如白菜型油菜中的

WRKY基因受ABA诱导[21]。

本研究基于WRKY转录因子的保守区域设计简并引物，PCR扩增获得15

条甘薯WRKY类转录因子基因片段，均含有WRKY转录因子的保守结构域，

然后将其导入甘薯栽培种中，为提高甘薯抗病抗逆性奠定基础。

1材料与方法

1.1材料

试验材料为