DB63_T 2288-2024 青稞品种鉴定技术规程 SNP分子标记法.docx

ICS65.020.01CCSB21

DB63

青海地方标准

DB63/T2288—2024

青稞品种鉴定技术规程SNP分子标记法

2024-6-19发布2024-7-25实施

青海省市场监督管理局发布

I

DB63/T2288—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由青海省农业农村厅提出并归口。

本文件起草单位：中国科学院西北高原生物研究所、青海省农作物种子站、海南州农牧业综合服务中心、青海省乡村产业发展指导中心。

本文件主要起草人：王寒冬、沈裕虎、王蕾、徐金青、边海燕、韩文婷、李春桥、薛明珍、王焕强、李俊仁、包天忠、赵璨、王健斌、陈同睿、尤恩、邓超。

本文件由青海省农业农村厅监督实施。

DB63/T2288—2024

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青稞品种鉴定技术规程SNP分子标记法

1范围

本文件规定了青稞（HordeumvalgareL.var.nudumHook.f.）品种鉴定SNP分子标记方法的术语和定义、缩略语、仪器设备及试剂、溶液配制、KASP引物信息、引物选择、操作程序、数据记录与统计、结果应用等技术要求。

本文件适用于青稞品种及种质资源的鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T3543.2

农作物种子检验规程

扦样

GB/T3543.4

农作物种子检验规程

发芽试验

GB/T3543.5

农作物种子检验规程

真实性和品种纯度鉴定

GB4404.1粮食作物种子第1部分：禾谷类

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法

GB/T30988多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

推荐引物

用本文件进行品种及种质资源鉴定时选用的一套SNP引物。3.2

参照品种

具有所用SNP位点上不同等位变异的品种。3.3

送检样品

送到种子检验机构检验的样品。

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3.4

试验样品

在实验室中从送检样品中分离出来的部分样品，供检验项目使用。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyriboNucleicAcid）

KASP：竞争性等位基因特异性PCR（KompetitiveAlleleSpecificPCR）

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

SNP：单核苷酸多态性（SingleNucleotidePolymorphism）

5仪器设备及试剂

仪器设备及试剂见附录A，所用试剂均为分析纯。本文件所使用的超纯水应符合GB/T6682的要求。

6溶液配制

见附录B。

7KASP引物信息

分为Ⅰ、Ⅱ两组。见附录C

8KASP引物选择

首先选择附录C中Ⅰ组引物进行扩增。当样品间检测出的差异位点数小于2时，选用附录C中Ⅰ、Ⅱ组所有引物进行扩增。

9操作程序

9.1样品准备

按照GB/T3543.5的规定，送检样品质量应符合GB4404.1粮食作物种子第1部分：禾谷类中对大麦种子纯度的要求。试验样品的分样应符合GB/T3543.2的规定。按照GB/T3543.4的规定进行发芽，供发芽的籽粒数须大于等于50粒。植株长至三叶一心时，按单株采取叶片进行样品制备。

9.2DNA样品制备

按照GB/T19495.3的方法或采用商用的植物基因组DNA提取试剂盒进行DNA的提取。每个送检品种制备的DNA样品数量须大于等于50个单株；单提、单检。试验样品DNA纯度、浓度测试应符合GB/T30988的规定。

9.3实时荧光定量PCR仪SNP分型

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SNP分型操作流程如下：

a)将2μLDNA样品编号后分别加到96孔PCR板上对应编号的反应孔中，每块PCR板均须加2个阴性对照（即用2μL超纯水替代DNA样品，其余所加试剂完全一致）。每块PCR板只检测一个送检品种。

b)