液质联用法测定婴幼儿奶粉中左旋肉碱含量不确定度评定.docx

液质联用法测定婴幼儿奶粉中左旋肉碱含量不确定度评定

左旋肉碱又称L－肉碱，是一种促进人体脂肪转换为动能的类碳水化合物，不仅可用于减肥类的保健食品，也可用于婴幼儿食品。奶粉中的左旋肉碱是促进奶粉中的脂肪分解、代谢、供能的重要营养素，可以促进体内脂肪的代谢和利用。婴幼儿饮食结构比较单一，其主要饮食来源为各种乳制品，主要能量来源为乳制品中的脂肪。添加左旋肉碱，可以提高婴幼儿对奶粉中脂肪的利用率[1]。因此，本文依据SN/T5146—2019第二法[2]液相色谱-质谱法测定婴幼儿奶粉中左旋肉碱的含量。同时，分析婴幼儿奶粉中的左旋肉碱含量不确定度，以供参考[3]。

1材料与方法

1.1试剂

乙腈（色谱纯，Merck）；甲醇（色谱纯，Merck）；氨水（AR，湖南汇虹）；盐酸（GR，国药集团）；甲酸（HPLC，科密欧），左旋肉碱（坛墨，批号2362012；含量99.90%；U=0.5%）；D3-左旋肉碱（TRC，批号：5-BKS-60-2）。

1.2标准溶液配制

1.2.1标准储备液

称取左旋肉碱标准品7.30mg，乙腈溶解，配制成浓度为729.27μg·mL-1的标准储备溶液，4℃以下避光保存。

1.2.2标准中间液

准确吸取标准储备液（729.27μg·mL-1）0.10mL，用乙腈稀释至10mL，摇匀，制成7.2927μg·mL-1的标准中间液，4℃以下避光保存。

1.2.3D3-左旋肉碱内标标准储备液

准确称取标准品5.00mg，用乙腈溶解，配制成浓度为500μg·mL-1的标准储备液，4℃以下避光保存。

1.2.4D3-左旋肉碱内标标准中间液

准确吸取D3-左旋肉碱内标标准储备液（500μg·mL-1）0.20mL，用乙腈稀释至10mL，摇匀，制成10μg·mL-1的标准中间液，4℃以下避光保存。

1.2.5标准工作液

准确移取标准中间液和内标标准中间液适量，用0.1%甲酸水溶液溶解并稀释，配制成内标浓度为100ng·mL-1，以及左旋肉碱浓度分别为0.3646、1.8232、18.2312、72.927、145.854、364.635ng·mL-1的系列标准溶液，现用现配。

1.3仪器与设备

AB-3500液质联用仪（美国AB）；十万分之一电子天平（XS205，梅特勒）；万分之一电子天平（AR224CN，奥豪斯）；ASE-12固相萃取装置；TG18G-Ⅱ离心机；WD-12氮吹仪；SHA-C(A）恒温水浴振荡器；SPE固相萃取柱（OasisMCX柱，60mg/3mL，Waters）。

1.4测定方法

1.4.1样品提取与净化

称取试样1g→50mL离心管→加内标标准中间液100μL→加入20mL的0.1mol·L-1盐酸溶液→摇匀，超声5min→加入5mL的1mol·L-1氢氧化钾溶液，混匀→60℃水浴皂化30min→冷却至室温→加5mL的1mol·L-1盐酸溶液→涡旋1min→移至50mL容量瓶→用0.1mol·L-1盐酸溶液润洗离心管，合并润洗液至容量瓶→用0.1mol·L-1盐酸溶液定容至刻度→取1.00mL提取液于15mL离心管→加入9.0mL乙腈→涡旋混匀1min→离心→取1.00mL上清液过OasisMCX固相萃取小柱（依次使用3mL甲醇、3mL水和3mL10mmol·L-1盐酸活化）→用3mL的10mmol·L-1盐酸溶液淋洗→弃去淋洗液→抽干小柱→加2mL4%氨水甲醇溶液洗脱→收集洗脱液→40℃氮吹干→加入1.0mL0.1%甲酸水溶液溶解残渣→过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。

1.4.2标准曲线建立

以左旋肉碱和D3-左旋肉碱浓度比为横坐标，左旋肉碱和D3-左旋肉碱内标峰面积比值为纵坐标，绘制标准曲线。

1.5建立数学模型

式中，X为样品中左旋肉碱的含量，mg·kg-1；V为样品定容体积，mL；n为样品稀释倍数；m为试样质量，g；1000为换算系数。

1.6不确定度来源的识别

对过程分析可知，左旋肉碱含量测定的不确定度主要有以下4个方面[4]：样品称量过程引入的标准不确定度urel（m）；样品测试液中左旋肉碱浓度引入的不确定度urel（C）；样品稀释体积引入的不确定度urel（V）；重复性引入的不确定度urel（r）。

2不确定度分量的评定与合成

2.1A类不确定度

重复性引入的不确定度urel（r），主要受操作过程、样品特性和仪器本身性能等因素的影响，独立测定6次，结果如下：35.88、36.27、36.59、35.57、36.59、36.50mg·kg-1。

6次测量标准偏差：