TCVMA 178-2024 犬和猫细小病毒PCR检测方法.docx

ICS11.220

CCSB41

团 体 标 准

T/CVMA178—2024

犬和猫细小病毒PCR检测方法

PCRdetectionmethodofcanineandfelineparvovirus

2024-9-9发布 2024-9-9实施

中国兽医协会 发布

T/CVMA178

T/CVMA178—2024

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前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国农业科学院北京畜牧兽医研究所提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件主要起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、上海基灵生物科技有限公司、东莞博盛生物科技有限公司、北京市动物疫病预防控制中心、山东合润检测技术有限公司、上海市动物疫病预防控制中心、广州源博医药科技有限公司、江苏农牧科技职业学院。

本文件主要起草人：梁瑞英、梁琳、汤新明、丁家波、侯绍华、朱旭、王弋、刘昕、张启龙、孙振、赖强、赵洪进、郝福星。

T/CVMA178

T/CVMA178—2024

T/CVMA178—20245.3高速台式冷冻离心机。5.4高压蒸汽灭菌器。5.5PCR仪。5.6单道微量移液器（0.1-2.5μL，0.5-10μL

T/CVMA178—2024

5.3

高速台式冷冻离心机。

5.4

高压蒸汽灭菌器。

5.5

PCR仪。

5.6

单道微量移液器（0.1-2.5μL，0.5-10μL，1-100μL，1-1000μL）。

5.7

电泳仪。

5.8

电泳槽。

5.9

凝胶成像仪。

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犬和猫细小病毒PCR检测方法

范围

本文件规定了检测犬细小病毒、猫泛白细胞减少症病毒（又称猫细小病毒）的通用PCR方法。本文件适用于感染犬细小病毒或猫细小病毒的犬或猫粪便、肛拭子、EDTA血液样品的检测。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法

GB19489 实验室生物安全通用要求

GB/T27401 实验室质量控制规范动物检疫

NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

缩略语

下列缩略语适用于本文件。

CPV：犬细小病毒（CanineParvovirus）FPV：猫细小病毒（FelineParvovirus）

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）SDS：十二烷基硫酸（sodiumdodecylsulfate）dNTP：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）

Tris：三羟甲基氨基甲烷（trishydroxymethylaminomethane）

TAE缓冲液：三羟甲基氨基甲烷_乙酸_乙二胺四乙酸（TrisAcetate-EDTAbuffer）TBE缓冲液：三羟甲基氨基甲烷_硼酸_乙二胺四乙酸（Tris-Borate-EDTAbuffer）Taq酶：耐热DNA聚合酶（ThermusAquaticusPolymerase）

主要仪器

冰箱。

台式离心机。

试剂和材料

试验用水均为灭菌超纯水，应符合GB/T6682中一级水的要求。

医用棉拭子、枪头（10μL，200μL，1000μL）。

1.5mLEP管。

0.2mLPCR管。

dNTP（含dATP、dTTP、dCTP、dGTP各10mmol/L，-20℃保存。）。

10%十二烷基硫酸钠：配制参见附录A.1。

蛋白酶K贮备液：配制参见附录A.2。

5×TAE电泳缓冲液：配制参见附录A.3。

5×TBE电泳缓冲液：配制参见附录A.4。

PBS配方：配制参见附录A.5。

PCR检测引物序列及反应液配方见附录B.1和B.2。

阳性对照的制备见附录C。

实验步骤

样品采集、保存与运输

样品采集

将无菌棉拭子用灭菌生理盐水充分浸润、采集肛拭子或粪便，将采集后拭子放入已装好病毒保存液的商品化样本收集管（也可使用等渗盐溶液、组织培养液或磷酸盐缓冲液），折断手柄，随即密封，即完成取样，编号并填写相应采样单，样品尽快送检，送检时添加冰袋，保持低温。

样品的保存与运输

用于病毒核酸检测的样品应尽快送检，可在24h之内检测的样本