2025年高考生物答题技巧与模板构建题型05 生物技术与功能类(3大模板）（解析版）.docxVIP

题型05生物技术与功能类

模板01利用PCR技术获取目的基因模板02利用PCR技术鉴定目的基因的连接方式

模板01利用PCR技术获取目的基因

模板02利用PCR技术鉴定目的基因的连接方式

模板03利用PCR技术引导基因定点突变

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常见设问/关键词

微生物的基本培养技术

2023·全国乙·T372022·天津·T32021·天津·T1

设问关键词：常规PCR、重叠延伸PCR、荧光定量PCR

发酵工程的原理及应用

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基因工程的基本工具

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基因工程的应用

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动物细胞融合和单克隆抗体的制备

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植物细胞工程的应用

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几种不同PCR的应用

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命题预测

PCR技术是近年高考热点，常涉及对PCR基本过程、引物的选择、多种PCR的应用

关键技巧

掌握PCR过程的基本原理

模板01利用PCR技术获取目的基因

获取目的基因是基因工程操作的第一步。获取目的基因的方法有多种，现在常用PCR特异性地快速扩增目的基因。PCR是聚合酶链式反应的缩写。它是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。该技术由穆里斯等人于1985年发明，为此，穆里斯于1993年获得了诺贝尔化学奖。

技巧01利用PCR技术获取目的基因

1．（2024·河南·模拟预测）数字PCR技术被称为第三代PCR,在核酸定量检测中具有突出优势。该技术通过将一个样本稀释分成几十至几万份，并分配到不同的反应单元，每个单元包含一个或多个拷贝的目标分子(DNA模板)，在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR扩增，扩增结束后对各个反应单元的荧光信号进行统计学分析，计算初始样品中靶标分子的拷贝数。据此分析，下列说法正确的是（）

A．数字PCR技术仅适用于样本中目标分子含量较高的材料

B．数字PCR技术遵循的基本原理是DNA的边解旋边复制

C．每个单元中加入等量的4种核糖核苷酸溶液作为扩增原料

D．每个单元中目标分子的两条子链合成都是从5端向3端延伸

【答案】D

【思路详解】A、数字PCR技术把检测样本稀释后分配到不同的反应单元，在每个单元进行一个或多个目标分子扩增，再对每个单元的扩增结果综合分析，计算初始样品中靶标分子的拷贝数。该技术对高、中、低水平的目标分子含量的材料均可实现正确、精密的测定，A错误；

B、数字PCR技术遵循的基本原理是DNA半保留复制，B错误；

CD、每个反应单元中分别对目标分子进行PCR扩增，需要加入4种脱氧核苷酸的等量混合液、与目标分子特异性结合的两种引物和TaqDNA聚合酶等，两条子链合成是从两种引物的3端开始连接脱氧核苷酸，C错误、D正确。

（2024·安徽芜湖·二模）不对称PCR是利用不等量的一对引物来产生大量单链DNA（ssDNA）的方法。加入的一对引物中含量较少的被称为限制性引物，含量较多的被称为非限制性引物。PCR反应最初的若干次循环中，其扩增产物主要是双链DNA（dsDNA），但当限制性引物消耗完后，就会产生大量的ssDNA。不对称PCR的简单过程如图所示。假设模板DNA分子初始数量为a个，6次循环后开始扩增产生ssDNA。下列有关叙述错误的是（????）

A．限制性引物和非限制性引物均可与模板DNA单链结合

B．不对称PCR循环6次需要消耗（26-1）a个限制性引物

C．最后获得的ssDNA中不含非限制性引物

D．子链的延伸都是从两种引物的3端开始的

【答案】C

【详解】A、据图可知，限制性引物和非限制性引物均可与模板DNA单链结合，A正确；

B、PCR扩增时引物是新子链的一部分，假设模板DNA分子初始数量为a个，6次循环后产生26个DNA分子，因此该不对称PCR过程中需要（26-1）·a个限制性引物，B正确；

C、据图可知，除模板链外，最终获得的ssDNA都是以乙链为模板合成的，因