基因工程的基本操作程序（第二课时）课件-高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

第三章基因工程;1、基因工程的基本操作程序（4个步骤）？

2、如何获取目的基因？

;就算可以进行转录和翻译成蛋白质，游离的DNA片段也无法随着细胞分裂进行复制，导致子代细胞不再含有目的基因;;活动一：请同学们自主阅读教材P80，小组合作思考讨论完成问题。;使目的基因在受体细胞中稳定存在，且可以遗传给下一代；

使目的基因能够在受体细胞中表达和发挥作用。;;①用一定的限制酶切割载体，使其出现一个切口。;启动子下游和终止子上游。因为只有插入在启动子和终止子之间，

目的基因才可以正常表达。;2.请结合下图思考，使用哪种限制酶同时处理质粒、外源DNA可以正确构建基因表达载体？;总结归纳1：限制酶的选择原则;(2)保留标记基因、启动子、终止子、复制原点原则：质粒作为载体必须具备标记基因，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中不选择SmaⅠ。若载体上有两个及以上的标记基因，则可合理对其中一些标记基因进行酶切破坏，从而达到比1个标记基因更高的筛选成功率，防止只有1个标记基因时出现的“假阳性”(即未成功导入目的基因的载体也能正常表达标记基因，造成无效筛选)。;(3)善用“双酶切”，注意方向性：目的基因所在序列和载体上存在多种酶切位点时，一般需要选择在目的基因所在序列和载体上都存在切割位点的两种不同的限制酶，对目的基因所在序列和载体进行剪切，即“双酶切法”。其优点和作用是：①防止目的基因环化；②避免目的基因与载体反向连接，即DNA连接酶连接后形成的重组DNA分子上，目的基因和载体启动子的方向(或描述为“RNA聚合酶的移动方向”)必须是相同的。否则目的基因导入后无法正常转录、表达。如图甲、乙也可选择PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶。;(4)巧用“同尾酶”：同尾酶指来源不同，但能产生相同黏性末端的限制酶。当不适合选择某种限制酶时，可用其同尾酶替换，以获得相同的黏性末端。;总结归纳2：区分启动子和终止子与起始密码子和终止密码子;启动子的类型

根据启动子的转录模式，可分为：

①组成型启动子能够调控基因的表达，使其基本恒定在一定程度上，从而使基因在不???部位或组织中的表达水平不存在明显差异。这类启动子一般来自管家基因，可连续不断地启动基因的表达。

②组织特异性启动子其调控作用使得基因往往只在某些特定器官或组织中表达，且表现出发育调节的特性。其最大的优势是其启动的外源基因在受体中仅在需要的部位特异表达，克服了组成型启动子启动的外源基因在受体植物中非特异、持续、高效表达所造成的浪费，增加了转基因的效果。

③诱导型启动子当诱导物存在时，可以激活或抑制目的基因的表达。;1(2023·新课标，6)某同学拟用限制酶(酶1、酶2、酶3和酶4)、DNA连接酶为工具，将目的基因(两端含相应限制酶的识别序列和切割位点)和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。限制酶的切割位点如图所示。下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是

A.质粒和目的基因都用酶3切割，用E.coliDNA

连接酶连接

B.质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用

T4DNA连接酶连接

C.质粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用

T4DNA连接酶连接

D.质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.coliDNA连接酶连接;2.(2023·湖北，4改编)用氨苄青霉素抗性基因(AmpR)、四环素抗性基因(TetR)作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体(重组质粒)，并转化到受体菌中。下列叙述错误的是

A.若用HindⅢ酶切，目的基因转录的产物可能不同

B.若用PvuⅠ酶切，在含Tet(四环素)培养基中的菌落，

不一定含有目的基因

C.若用ScaⅠ酶切，携带目的基因的受体菌在含Tet(四环素)的培养基中能形成菌落

D.若用SphⅠ酶切，携带目的基因的受体菌在含Amp(氨苄青霉素)和Tet的培养基中

能形成菌落;将目的基因与载体结合，构建好基因表达载体后，下面该进行什么操作？;活动三：请同学们自主阅读教材P81—82倒数第二段文字，思考以下问题。;目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。;;显微注射法示意图;（1）花粉管通道法（我国科学家独创）

;（2）农杆菌转化法;在用土壤农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞的过程中，一定要将目的基因插入Ti质粒的T－DNA上的原因是什么？;目的基因;第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上；;生物种类;A.图中Ⅰ是质粒，步骤①需要用到限制酶和DNA连接酶

B.图中Ⅱ是含目的基因的重组质粒，步骤②是将重组质粒导入棉花细胞

C.图中Ⅲ是农杆菌，通过步骤③将目的基因导入植物细胞