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层析技术层析技术层析法也称色谱法，是1906年俄国植物学家发现并命名的。他将植物叶子的色素通过装填有吸附剂的柱子，各种色素以不同的速率流动后形成不同的色带而被分开，由此得名为“色谱法”。后来无色物质也可利用吸附柱层析分离。0102031944年出现纸层析。以后层析法不断发展，相继出现气相层析、高压液相层析、薄层层析、亲和层析、凝胶层析等。引言层析法的基本原理层析法是利用混合物中各组分物理化学性质的差异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等），使各组分在两相（一相为固定的，称为固定相；另一相流过固定相，称为流动相）中的分布程度不同，从而使各组分以不同的速度移动而达到分离的目的。层析法的分类按两相所处的状态分类：01流动相有两种状态：02液体作为流动相03气体作为流动相04固定相也有两种状态：05固体吸附剂作为固定相06以吸附在固体上的液体作为固定相07按两相所处的状态分为：08液相层析液-固层析09液-液层析10气相层析气-固层析11气-液层析12按层析过程的机理分类吸附层析：利用吸附剂对不同组分吸附性能的差异，从而达到分离鉴定的目的。分配层析：利用不同组分在流动相和固定相之间的分配系数不同，使之分离。离子交换层析：利用不同组分对离子交换剂亲和力的不同，使之分离。凝胶层析：利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同，使之分离。0304050102柱层析：将固定相装于柱内，使样品沿一个方向移动从而达到分离。01纸层析：用滤纸做液体的载体，点样后，用流动相展开，以达到分离鉴定的目的。02薄层层析：将适当粒度的吸附剂铺成薄层，以纸层析类似的方法进行物质的分离和鉴定。03按操作形式不同分类柱层析把吸附剂装在一支玻璃管中,做成色谱柱。然后将试液加在柱内，若试液中含有A、B两种组分，则A和B便被吸附剂（固定相）吸附在柱的上端。再用一种洗脱剂（流动相）进行冲脱，这时在管内就连续不断发生溶解、吸附、再溶解、再吸附的现象。如果对A的吸附能力较弱，则A就较易溶解而较难吸附，在柱中移动就较快。当冲洗到一定程度时，两者即可以完全分开，形成两个带。在继续冲洗，A物质便从柱中流出来，将流出液承接于一个容器中。然后B物质被洗脱下来，用另一个容器承接。这样便可将A、B两种物质分离。如下图所示这是一种微量分离方法。1用滤纸做载体，利用纸上吸着的水分作为固定相，将滤纸条点试液的一端浸在有机溶剂中（注意不要把原点浸入有机溶剂中）该有机溶剂为流动相（展开剂）。由于滤纸条毛细管的作用。流动相将不断上升，当流动相上升的时候，与点在滤纸条上的试样相遇，这时试样中欲分离的组分就溶解在流动相中并随之上升。当欲分离的组分遇到上面的固定相时，又溶解在固定相中而停下来，接着又被不断上升的流动相所溶解。2于是就在两相之间一次又一次地发生分配过程（相当于一次又一次的萃取），从而将各组分逐个分开。3纸层析利用吸附剂对化合物吸附能力的不同而达到分离，吸附剂吸附能力的大小与化合物极性大小有关。由于硅胶或氧化铝薄层的毛细管作用，展开剂将沿着薄层逐渐上升。在上升过程中，当遇到新的吸附剂时，又被吸附下来。接着又被不断流过的展开剂溶解，再随着展开剂继续上升。试样中的各个组分将按照它们对硅胶或氧化铝吸附能力强弱的不同而分离开来。化合物极性大，被吸附剂吸附得牢，Rf值小，反之，化合物极性小，Rf值大。薄层层析特点：薄层层析法分离迅速，一般15~60min内可以完成，操作简便，灵敏度高。近年广泛应该在制药、农药、染料、抗生素等工业中。硅胶CMC—Na薄层板的制备：称取CMC—Na(羧甲基纤维素钠)0.15g→溶于30mL蒸馏水中→搅拌(如不溶可加热)至全部溶解→加入层析用硅胶10g→充分搅拌均匀，研磨成糊状→倒入玻璃板，用食指和拇指拿住玻片，作前后左右轻轻摇动，至流动的硅胶均匀地铺在玻璃片上,→水平放置，室温阴干至无水气存在→于105℃烘箱中活化2h→干燥器中冷却备用点样选取制备好的薄板一块，在距底边2cm的水平直线上选几个点，各点间距1.5或2cm，离板边约有lcm的距离。用毛细管分别点上不同的样品于各个点，样品量控制在5~10μg，斑点直径一般为2—3mm，干后再点一次。薄层层析操作方法展层显色：或使之出现各种有色的斑点，与标准进行对照比较，可确定其成分。点样完毕，待薄层上样品自然干燥后，将薄板置于盛有层析溶剂的层折缸中，薄板与液面成15℃左右的夹角，点有样品的一端浸入溶剂中，深达0.5cm左右、扩展剂液面应低于点样线，盖好层析槽盖，自下向上展层，当展层溶剂到达离薄板顶端约1cm处时取出薄板，标出溶