营养缺陷菌株筛选.pptVIP

（1）基本概念???营养缺陷型(auxotroph)某一野生型菌株由于发生基因突变而丧失合成一种或几种生长因子的能力，因而无法在基本培养基上正常生长繁殖的变异类型。???野生型（wildtype）：从自然界分离到的任何微生物在其发生营养缺陷型突变前的原始菌株。???原养型(prototroph)：一般指营养缺陷型突变株经回变或重组后产生的菌株，其营养要求在表型上与野生型相同。???基本培养基(MM)能够满足野生型菌株生长最低限度需要的培养基。???补充培养基(SM)凡能满足相应的营养缺陷型生长需要的培养基。在MM中加蛋白胨（多种氨基酸)便可以用来培养各种氨基酸的缺陷型；加入酵母浸膏(其中含有多种B族维生素和核苷酸)便可以培养不同的维生素、嘌呤和嘧啶缺陷型。???完全培养基(CM)凡能满足一切营养缺陷型生长需要的培养基。营养缺陷性突变株与营养要求有关的三类遗传型1诱变剂处理2淘汰野生型3检出缺陷型5限量补充培养法7影印接种法8鉴定缺陷型10抗生素法6逐个检出法4夹层培养法9菌丝过滤法2）营养缺陷型的筛选办法淘汰野生型：在诱变后的存活个体中，营养缺陷型的比例较低（百分之几～千分之几）。需选用适当的方法淘汰为数众多的野生型菌株，达到“浓缩”极少数营养缺陷型的目的。过滤法是使能在基本培养基上生长形成菌丝体的野生型留在滤膜上，不能生长的营养缺陷型孢子则能透过滤膜。营养缺陷型检出

逐个检出法涂布培养基本培养基上不长菌落完全培养基上长出菌落含诱变剂的液体培养基菌种营养缺陷型夹层检出法影印法限量补充培养法（同一培养皿）微量蛋白胨的基本培养基上小菌落是营养缺陷型突变株缺陷型的鉴定①生长谱法方法简便；回变和污染不影响结果测定物质可为粉末或纸片测定一般应分两阶段：第一阶段：测定是哪类物质的缺陷型；第二阶段：根据第一阶段确定的范围，进一步确定是哪种具体化合物的缺陷型；组合营养物法步骤（以氨基酸缺陷型的鉴定为例）：a.将多种营养因子编组；b.将组合液的纸片放在涂菌的基本培养基上培养；c.结果分析；一组：12345

二组：26789

三组：37101112

四组：48111314

五组：59121415营养因子分组编排时注意；1）每组内无重复的营养因子2）每组中应包含只出现一次的因子3）每组中其他因子应分别出现二次如：一组：12345

二组：26789

三组：37101112

四组：48111314

五组：59121415营养缺陷型的应用利用营养缺陷型突变株来生产氨基酸和核苷酸是典型的例子抗阻遏和抗反馈突变型都是由于代谢失调所造成的，在细胞中已经有大量最终代谢产物时仍然继续不断地合成这一产物。选育结构类似物抗性突变株结构类似物是指一些和细菌体内氨基酸、嘌呤、维生素等代谢产物结构相类似的物质主要用于末端产物的积累抗阻遏和抗反馈突变型