DB37T苹果轮纹病菌快速检测方法-格式审查稿.pdf

ICS65.020.20

B16

DB37

山东省地方标准

DB37/TXXXXX—XXXX

苹果轮纹病菌快速检测方法

Rapiddetectionofbotryosphaeriadothidea

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

山东省市场监督管理局发布

DB37/XXXXX—XXXX

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由山东省农业农村厅提出并组织实施。

本标准由山东省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：山东省烟台市农业科学研究院。

本标准主要起草人：王英姿、刘保友、汪少丽、王培松、石洁。

I

DB37/XXXXX—XXXX

苹果轮纹病菌快速检测方法

1范围

本标准规定了用环介导等温扩增（LAMP）快速检测苹果轮纹病菌的测定方法。

本标准适用于苹果叶片、枝条和果实中苹果轮纹病菌的快速检测。方法检出限：10-7ng/μL苹果轮

纹病菌DNA。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3原理

3.1扩增原理

根据苹果轮纹病菌的ITS序列中特异性序列设计特异性内、外引物及环引物各一对，特异性序列参

见附录A。三对引物特异性识别靶标序列上的六个独立区域，利用Bst酶启动循环链置换反应，在ITS基

因序列启动互补链合成，在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎-环DNA混合物，

加入显色液即可通过颜色变化观察判定结果。

3.2显色液显色原理

SYBRGreenI是一种高灵敏度的DNA荧光染料，可以嵌入方式结合到双链DNA的小沟内。当它与双链

DNA结合时，荧光信号是游离状态的800～1000倍。在不发生扩增反应时，SYBR染料分子的荧光信号不

发生改变，颜色显现为橙色；当发生扩增反应时，随着双链DNA的增加，SYBR染料的荧光信号也随之大

幅度增强，其信号强度可代表双链DNA分子的数量，同时颜色由橙色变为绿色。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

LAMP：环介导等温扩增（loop-mediatedisothermalamplification）

DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）

ITS：内转录间隔区（Internaltranscribedspacer）

2×LampMasterMix：等温扩增PCR混合液

Bst酶：BstDNA聚合酶（BstDNApolymerase）

5试剂和材料

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除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯；实验用水为GB/T6682