免疫学检测与防治2014传阅 学习资料.pptVIP

一、免疫学检测技术（二）二、免疫学防治本次课教学内容

P197第二十一章免疫学检测及其应用教学要求：1、掌握体外抗原抗体反应的特点及影响因素；凝集反应、沉淀反应与免疫标记技术的原理和方法2、熟悉淋巴细胞的分离、鉴定及T细胞功能测定。3、了解B细胞功能测定；免疫学检测方法的应用。

第一节抗原抗体反应的特点及影响因素第二节检测抗原抗体的体外试验第三节免疫细胞功能的检测本章教学内容

BLOODTYPETEST

抗原抗体反应：是指抗原和抗体之间所发生的特异性结合反应。可发生于体内（invivo），也可发生于体外（invitro）。简介

在体内（invivo），抗原抗体反应是体液免疫的基础Ag与Ab在体内结合可发生中和作用、调理吞噬、溶菌效应等

在体外（invitro）,Ag与Ab在体外结合，可出现凝集、沉淀、补体参与的溶血等反应。临床上一般多采用血清作试验。所以体外的抗原抗体反应又称为血清学反应。

体外抗原抗体反应的特点和影响因素

1．高度特异性：结构基础：由抗原表位与Ab的CDR互补结合所决定。----如抗白喉毒素只能与白喉毒素结合，不能与破伤风毒素结合。是一切血清学反应的基础。----临床上通过检测Ag或Ab可以诊断或辅助诊断疾病。一、体外抗原抗体反应的特点

Ag+AbAg-Ab非共价结合，保持动态平衡，在一定条件下是可逆的。Ag-Ab复合物的解离程度，除受环境条件（温度、PH、离子强度）影响之外，通常主要取决于Ag-Ab的亲和力。2.可逆性亲和力（affinity)：抗体分子上一个抗原结合部位与相应抗原表位之间的互补结合的强度

抗原和抗体之间发生可见反应需遵循一定的量比关系，只有当二者的浓度比例适当时，才出现可见反应。3．适宜的抗原抗体浓度和比例

前带后带等价带

网格学说(latticetheory)cross-linking

4.阶段性反应阶段特点①特异结合阶段发生特异结合，但不出现可见反应;反应快，仅需几秒至几分。②可见反应阶段可见的反应（凝集、沉淀、溶解细胞等），复合物受环境因素(pH、电解质、温度)的影响；反应慢，常需数分钟至数小时。在血清学反应中，两阶段往往不能严格分开。

适量电解质的存在，可使抗原抗体结合后呈现明显的沉淀或凝集等反应现象。无电解质存在，不出现可见反应现象。如果电解质浓度过高，会出现盐析现象。常用含生理盐水(8.5g/L,0.9%NaCl)的溶液作为抗原和抗体的稀释剂。1.电解质二、影响抗原抗体反应的因素

抗原抗体反应必须在合适的pH环境中进行，pH过高或过低，均可直接影响抗原抗体的反应性。血清学反应一般在pH6～8进行。补体结合反应及溶解反应最适为pH7.2～7.4。2.酸碱度（pH）

一定范围内，温度升高可增加抗原与抗体分子碰撞的机会，加快二者结合速度。不宜过高过低，保持适当。血清学反应一般以15～40℃为宜，最适为37℃。3.温度

总之,血清学反应影响因素较多，因此必须十分注意实验条件的选择和稳定，必须做好严格的实验对照(例如，阳性对照positivecontrol、阴性对照negativecontrol、标准品对照standardcontrol等)，只有这样才能保证结果准确。4.其它：震摇混匀等

三、免疫学检测技术的类型

第2节检测抗原和抗体的体外试验

在一定条件下（温度、PH、离子强度适宜），抗原与相应抗体在体外可发生特异性结合，出现可检测或观测的现象。第2节检测抗原和抗体的体外试验1、定性检测2、定量检测一、概述

据Ag性质、出现的现象、参与反应成分不同分：二、检测抗原和抗体的体外试验类型（三）免疫标记技术（一）凝集反应（二）沉淀反应

（一）凝集反应（Agglutinationreactions）颗粒性抗原（细菌、细胞或表面包被抗原的颗粒）与相应抗体在适当条件下特异性结合，出现肉眼可见的凝集团块的现象。适宜的温度、酸碱度、电解质等

颗粒性抗原直接与相应抗体反应出现的凝集现象，如红细胞凝集或细菌凝集。包括玻片凝集和试管凝集两种检测方法。1、直接凝集反应玻片法：试管法：定性试验半定量试验，肥达氏反应ABO血型鉴定、细菌鉴定（一）