胚胎工程实验之体外受精.ppt

发育阻断的出现时间与合子基因启动的时间有关，而且发育阻断的出现与否也是胚胎质量和培养条件相互作用的结果，在一定的培养条件下，某些特定品系的多数胚胎不表现发育阻断，而通过改善培养条件亦能提高通过发育阻断的胚胎比率。小鼠：2细胞牛羊：8-16细胞猪：4细胞人：4-8细胞第126页，共134页，星期日，2025年，2月5日使胚胎通过发育阻断，一直是胚胎体外培养研究的热点。经过多年的研究，与体细胞共培养是促使胚胎通过发育阻断最为有效的途径，而且随着近几年研究工作的不断深入，胚胎发育阻断也可以通过改善培养条件和在培养液中添加生长因子（TGF－和bFGF等）或细胞外基质因子（如肝素纤粘蛋白）克服。第127页，共134页，星期日，2025年，2月5日（二）培养液的基本成分及其功能培养液的基本成分主要包括无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物和蛋白质等，按其功能可分为渗透压维持因子、代谢底物和代谢调节因子等。1.无机盐：培养液中主要包括Na+、Cl－、K+、Mg2+、Ca2+、PO43－、SO42－和HCO3－等。2.能量底物：主要包括葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠和谷氨酰氨等。第128页，共134页，星期日，2025年，2月5日3.氨基酸：是蛋白质合成的前体，也参与胚胎的能量代谢，就单一氨基酸的作用而论，天冬氨酸、天冬酰氨、甘氨酸、组氨酸对胚胎发育均起促进作用，而半胱氨酸、亮氨酸、苏氨酸和颉氨酸起抑制作用。4.维生素：它作为碳水化合物和氨基酸代谢过程中必不可少的成分，能促进细胞对葡萄糖的摄取和乳糖的合成，从而影响胚胎的代谢和发育。5.生物体液和蛋白质：在基础液中添加一定比例的卵泡液、子宫分泌液和输卵管分泌液则对胚胎的发育具有促进作用。第129页，共134页，星期日，2025年，2月5日第94页，共134页，星期日，2025年，2月5日配子配合雄原核和雌原核经充分发育，逐渐相向移动。在卵子中央，核仁和核膜消失，两原核紧密接触，然后迅速收缩，染色体重新组合，并准备进行第一次有丝分裂，形成一个称为“合子”的单细胞胚胎。第95页，共134页，星期日，2025年，2月5日第96页，共134页，星期日，2025年，2月5日第97页，共134页，星期日，2025年，2月5日第二节体外受精一、概述二、精子的制备及获能三、卵的采集及体外成熟四、体外受精的方法五、体外受精质量的评定六、早期胚胎的体外培养七、影响体外受精的因素第98页，共134页，星期日，2025年，2月5日1998年我国首例试管婴儿诞生10周年时，张丽珠与郑萌珠在一起。北京医科大学第三医院第99页，共134页，星期日，2025年，2月5日2.历史1978年7月25日，第一例试管婴儿LouiseBrown在英国诞生，这是体外受精技术走向全面应用的标志性事件，是医学和生物学上的一次伟大的革命。而早在1878年，德国科学家Schenk就开始进行哺乳动物卵子体外受精的尝试。1890年，Heape用人工授精和体外受精技术研究兔的胚胎移植，胚胎可成功发育直至降生。第100页，共134页，星期日，2025年，2月5日直至20世纪40年代，世界上也只有为数不多的科学家能成功的进行哺乳动物体外受精试验。美国的Pincus和日本的Yamane是这时期的代表。美籍华人张明觉在1945年曾成功的进行了兔体外受精，但在此后的5年里没有能再重复出这一结果。这个时期的体外受精工作主要建立在经验基础上。第101页，共134页，星期日，2025年，2月5日1951年，Chang和澳大利亚的Austin几乎同时发现只有在雌性生殖道内停留一段时间的精子才能成功的与卵结合，进行体外受精。精子获能现象的发现是体外受精史上的一个里程碑。1959年，Chang利用体内获能处理的精子进行体外受精实验，获得世界上首例“试管动物”——试管兔，为哺乳动物体外受精工程奠定了基础。第102页，共134页，星期日，2025年，2月5日1963年，Yanagimachi和Chang首次报道了成功进行精子体外获能的实验（金黄仓鼠）。1970年，Mukherjee和Cohen，小鼠。1978年7月25日，第一例试管婴儿LouiseBrown在英国诞生（Steptoe和Edwards），这是体外受精技术走向全面应用的标志性事件，是医学和生物学上