医学分子生物学-DNA的损伤和修复.pptVIP

DNA的损伤和修复南华大学心血管疾病研究所王佐第一节DNA损伤诱发DNA损伤的因素：环境因素：辐射、化学毒物、药物、病毒感染、植物和微生物代谢产物等。生理因素：机体代谢过程中产生的有毒物质、DNA复制错配、DNA本身的热不稳定性。（一）辐射致DNA损伤根据作用原理的不同电离辐射（α粒子，β粒子，γ射线，Χ射线等）直接作用：能量直接传递给大分子而引起结构的破坏间接作用：辐射先作用于溶剂分子而产生活性物质从而导致细胞损伤非电离辐射（紫外线以及能量低于紫外线的电磁辐射）辐射引起的DNA损伤常见的有碱基的脱落、碱基破坏、嘧啶二聚体形成、单链和双链断裂、DNA交联等。（二）自由基致DNA损伤自由基：指能够独立存在，核外带有未配对电子的原子和分子。自由基的产生可以是外界因素与体内物质共同作用的结果。自由基可导致碱基、核糖、磷酸基的损伤，引起DNA的结构和功能异常。（三）化学毒物致DNA损伤按其作用原理可分为：碱基类似物碱基修饰物嵌入染料二、DNA损伤的类型DNA分子中的碱基、核糖和磷酸二酯键等均是DNA损伤作用的靶点。常见的损伤有：碱基脱落、碱基破坏、嘧啶二聚体形成、单链和双链DNA断裂、DNA交联、DNA-蛋白质交联等。（一）碱基和核糖的破坏由于碱基或者核糖的损伤，在DNA链上形成不稳定位点，最终可导致DNA链的断裂。（三）DNA链断裂磷酸二酯键的断裂和脱氧戊糖的破坏是引起DNA链断裂的直接原因。碱基的破坏和脱落在DNA链上形成的不稳定位点是DNA链断裂的间接原因。单链断裂（SSB）：一条链断裂的DNA双股螺旋双链断裂（DSB）：两条链于同一处或紧密相邻处同时断裂。（四）DNA交联链间交联：DNA双螺旋链上一条链上的碱基和另一条链上的碱基以共价键结合链内交联：DNA分子中同一条链内的两个碱基以共价键结合DNA－蛋白质交联：DNA和蛋白质以共价键结合第二节DNA损伤的修复DNA损伤的修复：指纠正错配的碱基，清除DNA链上的损伤，恢复DNA正常结构的过程。常见的DNA修复方式：回复修复、切除修复、错配修复和重组修复(一）回复修复细胞对DNA的某些损伤可以用很简单的方式加以修复在单一基因产物的催化下，一步反应就可以完成。这种修复方式叫回复修复。包括：酶光学复活、嘌呤的直接插入、O6－甲基鸟嘌呤－DNA甲基转移、单链断裂重接等。2）嘌呤的直接插入嘌呤插入酶受损嘌呤→APS→插入嘌呤（糖苷键）3）DNA单链断裂重接DNA单链断裂中有一部分是通过简单的重接而修复的，只需要一种酶——DNA连接酶(ligase)参加，因此也属于直接回复。DNA连接酶能催化DNA双螺旋结构中一条链缺口处的5’磷酸根与相邻的一个3’羟基形成磷酸二酯健。连接所需的能量ATP(如动物细胞)。将损伤的部位（或连同其附近的一定部位）切除，然后用正确配对的、完好的碱基替代修复。有多种酶和基因参与。过程：识别（损伤位点）→切除→修复（补）→连接1)碱基切除：特点是切除受损伤的碱基。主要过程是水解受损伤的碱基与脱氧核糖磷酸链之间的N—糖苷键。反应由糖基化酶催化。也即：糖基化酶→APS→内、外切酶去除残基→以对侧链为模板修补→DNA连接酶连接整个修复过程可分4步。E．coli的核苷酸切除修复机理在E．coli中，UvrA，UvrB，UvrC三种蛋白是必需的。而且必须同时存在才能发挥作用，所以也叫UvrABC切除核酸酶。UvrA是一种腺苷三磷酸酶，是损伤识别蛋白。它与UvrB结合成A2B1复合物，结合在损伤区，使DNA解旋、扭曲，并引起UvrB构象改变，与损伤部位形成紧密的结合。然后UvrA与UvrB—DNA复合物解离，后者成为UvrC特异结合靶。UvrB在损伤的3’侧作一内切，随而复合物构象改变，UvrC得以在5’侧作第二个切口。解旋酶Ⅱ(UvrD)使寡聚核苷酸片段及UvrC从DNA链上释放，然后DNA聚合酶Ⅰ取代UvrB。修补缺损区；最后由连接酶连接补片。当DNA双链发生严重损伤时需要另一种机理来完成正确的修复。一种情况是两条链同时受到损伤；另一种情况是单链损伤尚未修复时发生了复制，造成对应于损伤位置的新链缺乏正确模板；此时需要重组酶系将另一段未受损