4、一种基于Wnt-5ARor2信号通路的软骨细胞增殖方法.docx

发明专利申请

(10)申请公布号CN112680409A

(43)申请公布日2021.04.20

(21)申请号202011554925.2

(22)申请日2020.12.24

(71)申请人肌因美生物基因工程（上海）有限公司

权利要求书1页说明书5页附图2页

(54)发明名称

一种基于Wnt-5A/Ror2信号通路用于美容细胞再生的制剂

(57)摘要

CN112680409A本发明提供了一种基于Wnt-5A/Ror2信号通路用于美容细胞再生的制剂和培养基，能够在提高软骨细胞增殖能力及再生的同时改善与维持软骨细胞表型，提高软骨细胞体内应用的稳定性与安全性。本发明的细胞培养制剂可以降低基础培养基中通常的血清的使用含量，并显著促进软骨细胞的培养及再生，解决了美容软骨细胞培养使用的培养基成分复杂，培养困难，生长速度慢的问题。本发明的细胞增殖制剂是通过抑制Wnt-5A/Ror2信号通路调控IL-1β诱导软骨细胞的增殖及再生，因此，本发明的制剂可以作为一种信号因子用于软骨细胞的增殖及再生等，培养的细胞可以作为美容原料进一步应用于美容软骨损伤修复等。本发明提供的方法具有操作简单、方

CN112680409A

CN112680409A权利要求书1/1页

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1.一种用于美容软骨细胞培养及再生的培养基，包括基础培养基、浓度5-20％胎牛血

清和细胞增殖制剂，其特征在于，所述细胞增殖制剂为芦荟大黄素。

2.如权利要求1所述的用于美容软骨细胞培养及再生的培养基，其特征在于，所述芦荟大黄素的浓度为20-120μmol/L，优选40、60或80μmol/L。

3.如权利要求2所述的用于美容软骨细胞培养及再生的培养基，其特征在于，所述细胞增殖制剂进一步包括咖啡酸。

4.如权利要求3所述的用于美容软骨细胞培养及再生的培养基，其特征在于，所述咖啡酸的浓度为20-120μmol/L，优选40、60或80μmol/L。

5.如权利要求4所述的用于美容软骨细胞培养及再生的培养基，其特征在于，所述基础培养基选自DMEM或者DF12。

6.一种用于美容软骨细胞培养及再生的细胞增殖制剂，其特征在于，所述增殖制剂包括芦荟大黄素和咖啡酸。

7.一种美容软骨细胞增殖及再生的方法，其特征在于，包括：

(1)采用酶消化法从供体获取软骨细胞；

(2)将所述软骨细胞在权利要求1-5任一权利要求所述的培养基中培养；

(3)对培养增殖的美容软骨细胞进行纯化，保存备用。

8.芦荟大黄素和/或咖啡酸在制备用于美容软骨细胞培养及再生的细胞增殖制剂中的用途。

9.权利要求1-5任一权利要求所述的培养基和/或权利要求6所述的细胞增殖制剂作为信号因子在美容软骨细胞培养及再生中的应用，其特征在于，所述信号因子通过抑制Wnt-5A/Ror2信号通路调控IL-1β诱导软骨细胞的增殖及再生。

10.一种美容软骨细胞，其特征在于，所述美容软骨细胞采用权利要求1-5任一权利要求所述的培养基和/或权利要求6所述的细胞增殖制剂培养获得。

CN112680409A说明书1/5页

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一种基于Wnt-5A/Ror2信号通路用于美容细胞再生的制剂

技术领域

[0001]本发明涉及细胞培养领域，具体涉及一种用于美容软骨细胞培养及再生的制剂及其应用。

背景技术

[0002]关节软骨由包围在由软骨细胞产生的复杂的细胞外基质中的软骨细胞组成。此基质独特的生物化学组成提供了光滑的、几乎无摩擦运动的关节连接表面。由于创伤或疾病例如类风湿和骨关节炎而对软骨造成的损伤，能够导致严重的身体虚弱。软骨损伤后自我修复能力比较弱，临床研究对患者组织取材有限，并且也因为软骨细胞是终末分化细胞，体外增殖能力有限且易去分化，去分化是指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程。所以改善与维持软骨细胞表型在软骨细胞的临床应用中起着举足轻重的作用。

[0003]注射用自体软骨，可能是面部整形外科手术领域长期研究所期望获得的最理想的填充材料。传统上，组织工程软骨是将软骨细胞播种在合成聚合物支架上，再植入宿主体内。理想的面部注射填充材料，应该是可以注射填充同时可以原位塑形，长时间保持形状不变形，这其实就是组织工程所生产的可注射用软骨材料。而注射软骨细胞聚合物，可以最小的创伤达到矫正颅颌面缺损的目的。目前已有报道，藻酸盐和人软骨细胞的混合物，可以被塑形成任何的尺寸和形状，用于注射填充美容整形治疗，观察38周以上，没有任