黑腹果蝇ABC转运蛋白调控产卵功能研究.pdf

中文摘要

蜕皮激素调节黑腹果蝇生殖发育过程。传统观点认为，蜕皮激素是通过自

由扩散的方式进出细胞。然而这几年研究证明，SLC超家族成员EcI能将20E

（20-hydroxyecdysone）和E(ecdysone)作为底物运输进入细胞，ABC（ATP

binding-casstte）转运蛋白G家族成员Atet能介导E进入囊泡，然后通过胞吐作

用将E分泌出细胞。课题组前期研究发现ABCG8（CG3327）和ABCG4

（CG4822）基因可能参与细胞分泌20E的过程。但是，幼虫期蜕皮激素的来源

和成虫期卵巢20E的分泌目前还没有很深入地研究，仍然是一个未知领域。

本文基于这个问题进行了以下研究，通过下调果蝇八个不同组织部位

ABCG8基因的表达，统计果蝇不同龄期的死亡率，来证明ABCG8基因发挥主

要作用的组织部位。其次使用nos-Gal4驱动ABCG亚家族各基因进行RNAi干

扰，并饲喂20E，筛选出与蜕皮激素相关的基因。最后通过荧光原位杂交进一

步探究该基因的表达位置，然后利用RNAi下调卵巢内各细胞该基因表达，发

现在沉默晚期滤泡细胞该基因的表达时，会造成产卵量的减少，成熟卵子在卵

巢内堆积，并且影响果蝇腹部和卵巢的大小。

一、与果蝇发育相关幼虫期RNAi筛选

沉默ABCG8基因在果蝇神经、咽侧体、心侧体、脂肪体、绛色细胞、

马氏管和血淋巴的表达，发现脂肪体和绛色细胞在抑制ABCG8基因的表达

后，羽化阶段死亡率上升。换言之，当脂肪体和绛色细胞向外分泌蜕皮激

素的基因ABCG8下调后，其余组织部位无法接收到蜕皮激素信号，进而在

羽化阶段死亡率显著上升，说明果蝇幼虫期蜕皮激素的主要分泌组织部位

是脂肪体和绛色细胞。

二、与果蝇生殖相关的ABCGs筛选

雌性果蝇成虫期蜕皮激素的来源主要是卵巢，为探究蜕皮激素在果蝇

卵巢的分泌方式，选择下调对固醇类物质分泌起主要作用的ABCG亚家族

基因在卵巢内的表达，发现干扰ABCG8基因和CG32091基因对雌性果蝇

生殖能力有显著影响，进一步饲喂20E，发现仅ABCG8基因干扰后，产卵

能力下降能被20E拯救，说明果蝇卵巢中蜕皮激素的分泌与ABCG8基因有

关。

I

三、ABCG8在果蝇卵巢的表达分析

通过荧光原位杂交分析ABCG8基因在果蝇卵巢中的表达分布，发现

ABCG8基因在滋养细胞和滤泡细胞中高表达。之后，通过干扰果蝇卵巢各

细胞ABCG8基因的表达，发现滤泡细胞尤其是晚期滤泡细胞沉默ABCG8

基因后产卵量显著性下降。这两者都证实了ABCG8基因的主要表达位置是

在晚期滤泡细胞。通过筛选获取效果最好的晚期滤泡细胞Gal4驱动

ABCG8RNAi，分析杂交后代，发现大量成熟的卵子堆积在果蝇卵巢中，

果蝇卵巢和果蝇腹部均有增大的现象发生。所以我们思考，这就是造成雌

果蝇生殖能力下降的原因。

关键词：蜕皮激素；卵巢；ABCG8；滤泡细胞；脂肪体

II

ABSTRACT

Ecdysoneregulatesmultiplereproductiveanddevelopmentalprocesses

inDrosophilamelanogaster.Traditionally,ecdysonehasbeenthoughttobe

freelydiffusedinandoutofcells.However,inrecentyears,someexperts

havestudiedthatECI,amemberoftheSLCsuperfamily,cantransport20E

andEinto