2.2.2 动物细胞融合技术与单克隆抗体课件高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体“生物导弹”追踪癌细胞

植物体细胞杂交植物细胞融合植物组织培养温故而知新植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术的优势：打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育出新的作物类型。有没有技术能让不同种动物的体细胞杂交，培育出集不同细胞的优势于一身的动物细胞呢？

温故而知新实验：人——鼠细胞荧光标记融合实验融合细胞细胞融合37℃40min正在融合的细胞红色荧光染料标记膜蛋白绿色荧光染料标记膜蛋白人细胞小鼠细胞该实验说明：细胞膜具有流动性思考：如果让动物细胞进行融合，与植物有哪些不同之处？

1、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。2、原理：细胞膜的流动性3、诱导方式物理法：电融合法化学法：聚乙二醇（PEG)融合法生物法：灭活的病毒一、动物细胞融合技术

病毒紫外线灭活丧失感染活性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）（1）“灭活病毒”中灭活的具体含义是什么？灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。病毒表面的糖蛋白和一些酶与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。（2）灭活病毒诱导细胞融合的原理是什么？相关信息

1、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。4、结果：形成杂交细胞。即融合后形成的原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。2、原理：细胞膜的流动性3、诱导方式物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒一、动物细胞融合技术动物细胞融合动物细胞培养

正在融合的淋巴细胞与骨髓瘤细胞一、动物细胞融合技术5．意义：细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。6．应用(1)成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。(2)用于制造单克隆抗体。生产单克隆抗体

植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞融合前的处理方法诱导细胞融合的方法细胞融合成功的标志主要用途意义细胞膜具有一定的流动性、植物细胞的全能性细胞膜具有一定的流动性用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞电融合法、离心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法再生出细胞壁细胞核的融合获得完整的杂种植株主要用于制造单克隆抗体打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能小结：动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较

典例：对比动物细胞融合和植物体细胞杂交技术，下列论述合理的是A.均可使用PEG、电融合或灭活病毒诱导细胞融合B.两者都可以跨越种属间的生殖隔离C.两者都可以体现细胞的全能性D.在适宜的条件下，均可产生完整个体√

1.定义：机体受抗原刺激后产生的，能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。2.抗体的分布：（1）血清（主要）（2）组织液及外分泌液（如乳汁中，为新生儿提供抗体）3.机体通过什么免疫过程分泌抗体？体液免疫抗体二、单克隆抗体的制备

二、单克隆抗体的制备1.传统抗体制备方法及缺陷向动物体内反复注射某种抗原从动物血清中分离所需抗体产量低、纯度低、特异性差（2）缺点：（1）方法：如何解决这个问题呢？

二、单克隆抗体的制备１）体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上２）每个B淋巴细胞（浆细胞）只分泌一种特异性的抗体科学家发现：单克隆抗体如何获得大量、单一的抗体？体外培养时，一个B淋巴细胞不能无限增殖需解决问题：遗憾：如何解决这一难题？一个B淋巴细胞B淋巴细胞群单一抗体克隆

二、单克隆抗体的制备一个极富创造力的方案：动物细胞融合杂交细胞动物细胞培养单克隆抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体1975年，米尔斯坦和柯勒1984年，诺贝尔生理学或医学奖既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体

二、单克隆抗体的制备用特定抗原注射小鼠培养骨髓瘤细胞目的：获得已免疫B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合多种杂交细胞小鼠的脾脏中获取2.单克隆抗体的制备过程小鼠的骨髓中获取

二、单克隆抗体的制备第一次筛选融合的细胞骨髓瘤细胞自身融合B细胞自身融合杂交细胞132未融合的B淋巴细胞未融合的骨髓瘤细胞置于选择性培养基上培养（HAT培养基）2杂交瘤细胞13（特点：既能迅速大量增殖，又能产生抗体）（目的：筛选获得杂交瘤细胞）

筛选原理：①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能分裂增殖。③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但能不断分裂增殖。筛选出杂交瘤细胞方法？B淋巴细胞及同型融合细胞不能无限增殖，死亡骨髓瘤细胞及同型融合细胞D途径被阻断，